t细胞来源exosomes调节妊娠丢失孕鼠外周t细胞功能诱导母胎免疫耐受的研究

《t细胞来源exosomes调节妊娠丢失孕鼠外周t细胞功能诱导母胎免疫耐受的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、目录1IIIIIIIllllllllllllllIllllillllllilllllillY2337382中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6研究论文T细胞来源Exosomes调节妊娠丢失孕鼠外周T细胞功能诱导母胎免疫耐受的研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1—3一刚舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯14结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯39综述不明原因复发性流产的临床干预策略研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯53个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯54中文摘要T细胞来源Exosomes调节妊娠丢失孕鼠外周T细胞功能诱导母胎免疫耐受的研究摘要目的：反复妊娠丢失指自然流产连续发生

3、3次或3次以上者，其发生率约占自然流产病例的3％一5％，但仍有50％．60％原因不明，称为不明原因反复妊娠丢失(URSA)，严重影响着孕妇的身心健康。随着生殖免疫医学的发展，研究表明URSA主要与免疫因素有关，是母体对胎儿免疫排斥的结果。妊娠是一种同种异体移植，胚胎被母体的免疫机制识别并接纳后，妊娠才能得以正常维持。因此，诱导母体对同种异体胎儿抗原的免疫耐受是治疗的关键。国内外研究表明当前临床多采用免疫细胞过继疗法治疗URSA，诱导母体对同种异体胚儿抗原的免疫耐受，但是这种方法存在较多的局限性。本研究采用流产实验动物模型，分析T细胞来源的非细胞成分Exosomes调节妊娠丢失孕鼠

4、外周T细胞功能以诱导母胎免疫耐受，确定分析T细胞来源Exosomes取代传统“免疫细胞过继疗法”治疗妊娠丢失的免疫学机制，为今后开展临床应用奠定实验基础并提供理论依据。1雄性无关个体脾细胞及其Exosomes的制备和初步鉴定：断颈处死BALB／c雄鼠，无菌条件下解剖取脾组织，获得单个细胞悬液，采用蔗糖密度梯度离心联合超滤技术获得Exosomes；通过扫描电镜、透射电镜观察Exosomes的形态、结构，紫外分光光度法测定其蛋白含量。2妊娠丢失实验动物模型的建立：雌雄小鼠随机分为4组后按2：1合笼交配；CBA／J(早)×BALB／c(艿)为正常妊娠对照组(Contro组)，CBM(早

5、)×DB舭(艿)为URSA组。再将URSA孕鼠分别于孕第4天无特殊处理，给予尾静脉注射无关个体BALB／c雄鼠脾单个核细胞及无关个体BALB／c雄鼠脾T细胞来源的Exosomes，随机分为妊娠丢失组(URSA组、)、细胞治疗组(CellularTherapy组)、非细胞治疗组(Non．cellularTherapy组)。3胚胎发育情况的观察：于妊娠第14天分别将各组CBA／J孕鼠处死，测量计算胎盘体积，计数各组吸收胚胎个数及存活胚胎个数，根据公式计中文摘要算出胚胎吸收率及妊娠丢失率。4母胎免疫耐受状况的分析：于妊娠第14天分别处死各组CBA／J孕鼠，无菌解剖取脾组织，制备单个脾细

6、胞悬液。MTT染色法检测单向混合淋巴反应、双向混合淋巴反应中T细胞转化的彳彳92值。5孕鼠外周T淋巴细胞免疫功能变化的检测：于妊娠第14天分别处死各组CBA／J孕鼠，无菌解剖取脾组织，制备单个脾细胞悬液。直接荧光标记流式细胞计数(FCM)分别检测T细胞表面CD3、CD4、CD8、CD247、CD25、IL．17、CD28、CTLA一4的表达，分别计算CD3+、CD4+CD8。、(：D4。CI)8+、(：I)3+CD247+、CD4+CD25+、IL．17+、CD4+CD28+、CD4+CTLA一4+细胞的百分率。6统计学处理：各组数据均通过SPSSl3．0版本软件进行正态性、方差

7、齐性检验，采用卡方检验比较各组孕鼠胚胎发育情况；采用F检验对孕鼠T细胞免疫功能进行单因素方差分析(ANOVA)，S．N．K法进一步对多个样本均数间进行两两比较。结果：l雄性无关个体脾脏T细胞来源Exosomes的初步鉴定1．1形态及超微结构观察及蛋白定量扫描及透射电镜下观察，T细胞分泌的Exosomes为脂质双分子层膜包围的球体，呈椭圆形或圆形杯口状，胞膜完整，直径约为30nm--一100nm，内为低电子密度物质。紫外分光光度法蛋白定量显示Exosomes的A280值为0．343