opg对破骨细胞分化的影响及其rho信号转导机制

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1、４７分类号学号ＭＺ１２４ＩＤＣ密级餘媛叫大聲ＹＡＮＧＺＨＯＵＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ硕去学侄冷文（专业型）ＯＰＧ对破骨细胞分化的影响及其Ｒｉｏｌ信号转导机制高倩２５００９指导救师姓名：刘宗平教授，扬州大学，江苏扬州，２申请学位级别：硕壬＿＿学科专业名称：兽區巧去．４月２０１５论文提交日期：２０１５年论文答辩日期：年６月２０１５年６月学位授予单位：扬州欠学学位授予日期：答辩委员会主席：２０５年６１月ＯＰＧ对破骨细胞分化的影响及其Ｒｈｏ信

2、号转导化制Ｉｎ打ｕｅｎｃｅｓｏｆｏｓｔｅｏｒｏｔ；ｅｅｒｉｎｏｎｔｈｅｐｇｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｏｓ１：ｅｏｃｌａｓｔａｎｄ化ｅＲｈｏｓｉｎａｌｌｉｎａｔｈｗａｓｇｇｐｙ研究生：离倩导师：刘宗平教授专业Ｓ兽医硕女资助项目；国家自然科学基金（３１１７２３７３３１３７２４９５），扬州大学兽医学院２０１５年６月高倩ＯＰＧ对破骨细胞分化的影响及其Ｒｈｏ信号转导机制１中文摘要为探讨骨保护素（ｏｓｔｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ，ＯＰＧ）

3、对体外培养破骨细胞（ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ，ＯＣ）分化的影响Ｗ及Ｒｈｏ信号转导机制／－ＣＳＦ和，本文采用２５ｎｇｍＬＭ３０ｎｇ／ｍＬＲＡＮＫＬ体外联合诱导ＲＡＷ２６４．７细胞分化为ＯＣ。在培养过程中添加不同浓度的ＯＰＧ（０、２０、４０、８０ｎｇ／ｍＬ），作用２４ｈ，利用ＴＲＡＰ染色观察ＯＣ分化过程中的形态学变化、骨吸收陷窝－ａｃｔｉｎ检测细胞的骨吸收活性、免疫巧光检测Ｆ环的形成，扫描电镜观察伪足的变化，实ｎ－时巧光定量ＰＣＲ（ｒｅａｌｔｉｍｅｕａｔｉｔａｔｉｖｅｏｌｍｅｒａｓ

4、ｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＲＴＰＣＲ）检测ＴＲＡＰ、ｑｐｙＱＣａＡｅｐｓｉｎＫ、Ｃｄｃ４２Ｖｌ、Ｃｄｃ４２Ｖ２、Ｒａｃｌ、Ｒａｃ２、Ｒａｃ３基因的变化，＾｛ｅｓｔｅｒｎ＾及免疫印迹（ｗｂｌｏｔ）检测ＴＲＡＰ、ＣａｔｈｅｐｓｉｎＫ、ＰＡＫｌ、ＰＡＫ２、ＰＡＫ３、ＬＩＭＫ、ｃｏｆｉｌｉｎ相关信号蛋白的表达。－结果表明：①用２５ｎｇ／ｍＬＭＣＳＦ及３０ｎｇ／ｍＬＲＡＮＫＬ联合诱导ＲＡＷ２６４．７细胞形成ＯＣ过程中，与ＯＣ分化和骨吸收相关的ＴＲＡＰ、ＣａｔｈｅｐｓｉｎＫ

5、基因及蛋白的表法均显著或？＜０极显著上升（ｉ．０５或户＜０．０１）；②ＯＣ分化的第３ｄ，加入ＯＰＧ处理２４ｈ后，能极显著Ｏ＞＜减少Ｃ的数目及骨吸收陷窝面积（ｉ０．０１），并且极显著降低与ＯＣ分化和骨吸收相关ＡＰ、Ｃ化－的ＴＲａｅｓｉｎＫ蛋白的表达（於０．０１）ＯＰＧ可抑制０ＣＦａｃｔｉｎ环的形成，ｐ；③的ＯＰＧ处理组细胞伪足小体（ｐｓｅｕｄｏｐｏｄｉａｃｏｒｐｕｓｃｌｅ）的聚合能力降低，排布散乱，肌动蛋－－白环（ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓａｃｔｉｎｒｉｎｇｓ，Ｆａｃｔｉｎｒｉｎｇｓ）

6、、丝状伪足（ｆｉｌｏｐｏｄｉａ）和板状伪足Ｏａｍｅｌｌｉｐｏｄｉａ）数量减少ＯＰＧ可显ＯＣｈｏｄｃ４２Ｖｌ、Ｃｄｃ４２Ｖ２、；④著或极显著降化分化过程中Ｒ家族的ＣＲａｃ２、Ｒａｃ３基因的表达（戶＜０．０５或Ｐ＜０．０１），并且显著或极显著降低Ｒｈｏ通路相关蛋白ＰＡＫ１的Ｓｅｒｌ４４和Ｔｈｒ４２３位点、ＰＡＫ２的Ｓｅｒｌ４１和Ｔｈｒ４０２位点、ＬＩＭＫ１的Ｔｈｒ５０８位＞＜＜点、ＬＩＭＫ２的Ｔｈｒ５０５位点的憐酸化水平（ｉ０．０５或户０．０１），显著或极显著增加ｃｏｆｉ

7、ｌｉｎ的磯酸化水平（戶＜０．０５或戶＜０．０１），且随ＯＰＧ浓度的升髙抑制或増加的作用更加明显。结论：ＯＰＧ能够抑制ＯＣ的分化，降低ＯＣ的骨吸收活性，并且Ｒｈｏ信号通路参与了ＯＰＧ抑制ＯＣ的分化过愚ＯＰＧ能够通过抑制Ｒｈｏ家族基因Ｃｄｃ４２Ｖｌ、Ｃｄｃ４２Ｖ２、民ａｃ２、Ｒａｃ３的表达，下调下游鞭蛋白ＰＡＫ的表达，降低ＬＩＭＫ的磯酸化水平，从而上调ｃｏｆｉｌｉｎ的稱酸化，最终抑制ＯＣ的分化成熟。：ＲＡＷ２６４．７Ｒｈｏ关键词骨保护素；细胞；；；破骨细胞分化信号通路ｎ扬州大学硕±学位

8、论文ＡＢＳＴＲＡＣＴＴｏｃｌａｒｉｆｙｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｏｓｔ；ｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ（ＯＰＧ）ｉｎｈｉｂｉｔｓｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｓ（ＯＣｓ）ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｒｏｌｅｏｆＲｈｏｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｉｎ化ｉｓｍｅｃｈａｎｉｓｍｍｏｕｓｅｍｏｎｏｃｔｉｃ，ｙ－ｌ２５ｎＬＭＲＡ