紫杉醇对破骨细胞形成、分化及凋亡的影响

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。研究生签名：导师签章夕彩场二僧诚研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注等内容外，文中不包括其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由

2、本人独立撰写，文责自负。研究生签名：导师签章．膨如，多年弓月)7日目录LIIIIIIIIIIIIIlIIIIIIIIMIIIMIIIIIIIIY2336709中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯01英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯04研究论文紫杉醇对破骨细胞形成、分化及凋亡的影响前言08刚舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。．U芍材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯p8结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．。21讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．22结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2鲁参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．24综述紫杉醇及破骨细胞的相关性研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯39个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40中文摘要紫杉醇对破骨细胞形成、分化及凋亡的影响摘要目的：利用RAW264．7小鼠巨噬细胞株(破骨前驱细胞株)培养系，

4、研究紫杉醇对体外培养的破骨前驱细胞形成及分化的影响，并通过流式细胞技术，观察紫杉醇是否通过调亡途径抑制破骨前驱细胞的形成及分化。方法：选用RAW264．7小鼠巨噬细胞株(破骨前驱细胞株)，进行破骨细胞的体外诱导培养，观察紫杉醇对破骨细胞形成及分化的影响，并通过流式细胞术分析紫杉醇是否对破骨细胞凋亡途径有影响。1细胞培养及药物添加：1．1细胞复苏和培养：从．700C液氮罐中取冻存RAW264．7小鼠巨噬细胞株2管，迅速放入370C恒温水浴箱中快速复苏(复苏时fM4,于1分钟)，然后放至盛有10％胎牛血清的仪。MEM培养液的离心管中离心5分钟(1000转／分)，弃去上清液

5、，再加入含10％胎牛血清的仅．MEM培养液10ml，吹打混匀后使形成单细胞悬液，然后移至培养瓶中，放置于370C、5％C02培养箱中孵育48—72小时，待培养瓶底细胞密度达到90％以上时，用1％胰酶+EDTA将细胞重悬收集细胞于离心管内离心5分钟(1000转／分)，离心后弃去上清液，再加入含10％胎牛血清的Q．MEM培养液5ml，充分吹打混匀后使细胞重悬成单细胞悬液，用细胞计数板算出此时的细胞浓度，然后配制成4．5×104cells／ml目的浓度的细胞悬液，加入破骨细胞分化因子sRANKL50ng／ml、青霉素100单位／ml和链霉素100ug／ml。将细胞播种于96

6、孔培养板(4行6列)中，每孔加入浓度为4．5x104cells／ml的细胞悬液150ul。将培养板置于37。C、5％C02培养箱中培养，培养5天。1．2药物的添加：将配好浓度的细胞播种在经灭菌处理的96孔培养板中(共4行6列)，将第一列作为本次实验的对照组，不添加药物。第二至五列依次加入紫杉醇，其浓度分别为10一、10一、10～、10一、10一mol／L。每个浓度每列添加4孔。2抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色：细胞培养至第5天后行TRAP染色(按试剂盒说明操作)，然后在倒置光镜下观察，计算TRAP染色阳性细胞数。观察紫杉醇对破骨前驱细胞的抑制作用。中文摘要3流式细

7、胞术检测细胞凋亡：3．1细胞培养：将复苏后拟用于流式细胞检测的细胞继续培养，待培养瓶底的细胞密度达到90％以上时，从培养箱内取出，用1％胰酶+EDTA消化细胞，然后加入含10％胎牛血清的仅．MEM培养液8ml吹打混匀使细胞重悬，收集细胞至15ml离心管内离心5分钟(1000转／分)，然后弃去上清液，再次加入含10％胎牛血清的仪．MEM培养液5ml，吹打混匀后形成单细胞悬液，用细胞计数板算出此时细胞原液浓度，然后再根据公式配制成目的浓度为4．5×104cells／ml的细胞悬液，并向配置好的细胞悬液中加入sRANKL50ng／ml、青霉素100单位／r