高铁环境对破骨细胞分化的影响及机制

《高铁环境对破骨细胞分化的影响及机制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、万方数据·2512·虫堡塞坠2E型盘查!!!!堡!!旦筮!!鲞筮!!塑￡!也』垦坐!!坚：塑!!!婴坠堕!!!!：!塑：!!：盟!：!!高铁环境对破骨细胞分化的影响及机制王啸汪升陈斌沈光思费蓓蓓林华徐又佳【摘要】目的观察高铁环境对单核细胞RAW264．7向破骨细胞分化的影响及核转录因子二聚体p50一p65在其中的作用。方法RAW264．7细胞以梯度莉量0～400ixmol／L枸橼酸铁铵(FAC)干预，细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖能力，以核因子．KB受体活化因子配体(RANKL)诱导，行抗酒石酸

2、酸性磷酸酶(TRAP)染色，根据染色结果选择效果最优组，与磷酸盐缓冲液(PBS)干预组对照。破骨细胞分化能力采用噬骨陷窝实验及荧光定量聚合酶链反应(FQ—PeR)检测；荧光探针检测活性氧(ROS)水平。Westernblot检测胞质蛋白050、p65及胞核蛋白050、p65、磷酸化050(p-050)、磷酸化p65(p—p65)表达差异。结果CCK-8结果表明，浓度范围在0—50IJLmol／L的FAC对细胞增殖无明显影响(P>0．05)。TRAP染色示50p．mol／LFAC处理组阳性细胞数为(41．6

3、7±5．46)个，明显高于对照组的(20．00±4．00)个，噬骨陷窝数也高于对照组(P<0．05)。ROS检测结果显示：FAC干预组荧光较对照组增强。FQ—PCR结果示：FAC组酸性磷酸酶5(Aep5)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、降钙素受体(CTR)表达量分别为对照组的2．49、3．3l、9．20倍(P<0．05)。Westernblot结果：两组核蛋白p-p50、胞质蛋白p65表达差异无统计学意义，FAC组核蛋白p65、p50、p-p65表达为对照组的14．38、15．32、3．88倍(P<0

4、．05)，胞质蛋白p50为对照组0．76倍(P<0．05)。结论铁离子在一定范围内升高ROS水平，进而促进p50一p65二聚体核易位，促进破骨细胞分化。【关键词】骨质疏松；050-p65；破骨细胞；铁蓄积；活性氧E仃ectsoflIighlevelofferticicononosteoclastsdifferentiation％硝X／ao+，贶曙Sheng，ChenBin，ShenGuangsi，&iBeibei，LinHua，XuYoujia．+DepartmentofOrthopedics，￡船Sec

5、ondAffiliatedHospitalofSoochowUniversity．Suzhou215D舛．ChinaCorresporulingauthor：托110蜊o。Email：xuyoujia@medmail．COIT}．ca【Abstract】objectiveToinvestigatetheimpactsofironaccumulationondifferentiationofmonO—cytesRAW264．7cellsintoosteoclasts，aswellastheeffectsof

6、p50一p65dimeronironinducedactivationofosteoelastdifierentiation．MethodsRAW264．7cellsweretreatedwithdifferentconcenn·ationsoJ’Femcammoniumcitrate(FAC)．Abilityofcellproliferationineachgroupwasobservedbycellcountingkit(CCK．8)method．Tartrate—resistantacidphosp

7、hatase(TRAP)stainingwasconductedundertheinductionofRANKL。whichcanstimulateosteoclastsdifferentiation．Chose出emostobviouseffectofdosegroup，thenCalTyoutaresorptionpitsassayand2’．7’．dichlorofluorescindiacetate(DCFH)analysis．Expres—sionsofacidphosphatase5(Ac05

8、)，matrixmetalloproteinase9(MMP-9)andcahitoninreceptor(CTR)wereexaminedwithreal—timefluorescentquantitativepolymerasechainreaction(FQ—PCR)．CytoplasmicandnuclearproteinswereextractedforWesternbolting．ResultsFACat0-50I