wnt3a对小鼠破骨细胞分化调控的影响

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1、第３５卷第５期第三军医大学学报Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．５４１２２０１３年３月１５日ＪＴｈｉｒｄＭｉｌＭｅｄＵｎｉｖＭａｒ．１５２０１３论著文章编号：１０００５４０４（２０１３）０５０４１２０４Ｗｎｔ３ａ对小鼠破骨细胞分化调控的影响１，２１，２１，２１，２１，３１李红丽，申利红，芦永良，冯涛，黄佳（４０００１６重庆，重庆医科大学：分子医学与肿瘤研究中心，生物化２３学与分子生物学教研室，病理生理学教研室）［摘要］目的探讨Ｗｎｔ３ａ对小鼠破骨细胞分化调控的影响。方法将细胞分为４组：阴性对照组（即空白组）、实验对照组（感染ＡｄＧＦＰ组）、阳性对照

2、组（５０ｎｇ／ｍｌＲＡＮＫＬ诱导组）、实验组（感染ＡｄＷｎｔ３ａ组）。分别给予处理因素后常规细胞培养６ｄ，通过酒石酸抗酸性磷酸酶（ＴＲＡＰ）染色观察破骨细胞的分化成熟情况；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ＴＲＡＰ、ＣａｔｈｅｐｓｉｎＫ蛋白的表达；分别于处理因素后３、６、９ｄ提取细胞总ＲＮＡ，荧光定量Ｒｅａｌｔｉｍｅ（ＲＴＰＣＲ）检测核因子κＢ受体（ＲＡＮＫ）、抗酒石酸酸性磷酸酶（ＴＲＡＰ）、组织蛋白酶Ｋ（ＣａｔｈｅｐｓｉｎＫ）、基质金属蛋白酶９（ＭＭＰ９）基因的表达。结果ＴＲＡＰ染色显示５０ｎｇ／ｍＬＲＡＮＫＬ诱导组能成功诱导ＲＡＷ２６４．

3、７成多核（核≥１０），空白组和ＡｄＧＦＰ组有少量多核细胞（３≤核≤５），ＡｄＷｎｔ３ａ组为单核有个别双核；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测显示ＡｄＷｎｔ３ａ组ＴＲＡＰ、ＣａｔｈｅｐｓｉｎＫ蛋白表达降低，差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；ＲＴＰＣＲ检测ＡｄＷｎｔ３ａ组能下调ＲＡＮＫ、ＴＲＡＰ、ＣａｔｈｅｐｓｉｎＫ、ＭＭＰ９基因的表达。结论Ｗｎｔ３ａ能抑制ＲＡＷ２６４．７分化成成熟的破骨细胞。［关键词］Ｗｎｔ３ａ，ＲＡＷ２６４．７，ＲＡＮＫＬ，ＴＲＡＰ［中图法分类号］Ｒ３２２．７１；Ｒ３２９．２８；Ｒ３９４．２［文献标志码］ＡＥｆｆｅｃｔｏ

4、ｆＷｎｔ３ａｏｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｍｏｕｓｅｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ１，２１，２１，２１，２１，３１ＬｉＨｏｎｇｌｉ，ＳｈｅｎＬｉｈｏｎｇ，ＬｕＹｏｎｇｌｉａｎｇ，ＦｅｎｇＴａｏ，ＨｕａｎｇＪｉａｙｉ（ＣｅｎｔｅｒＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＭｅｄｉｃｉｎｅａｎｄ２３ＴｕｍｏｒＲｅｓｅａｒｃｈ，ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＢａｓｉｃＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈｏ

5、ｎｇｑｉｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ，４０００１６，Ｃｈｉｎａ）［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｒｏｌｅｏｆＷｎｔ３ａｉｎｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｍｏｕｓｅｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＣｅｌｌｓｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏａｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（ｂｌａｎｋ），ａｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（ＡｄＧＦＰｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ），ａｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（５０ｎｇ／ｍＬＲＡＮＫ

6、Ｌｉｎｄｕｃｔｉｏｎ），ａｎｄａｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐ（ＡｄＷｎｔ３ａｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）．Ａｌｌｔｈｅｃｅｌｌｓｗｅｒｅｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌｌｙｃｕｌｔｕｒｅｄｆｏｒ６ｄ．Ｔａｒｔｒａｔｅｒｅｓｉｓｔａｎｔａｃｉｄｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ（ＴＲＡＰ）ｓｔａｉｎｉｎｇｗａｓａｐｐｌｉｅｄｔｏｏｂｓｅｒｖｅｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｎｄｍａｔｕｒａｔｉｏｎ，ａｎｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔａｎａｌｙｓｉｓｗａｓａｐｐｌｉｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＴＲＡＰａｎｄｃ

7、ａｔｈｅｐｓｉｎＫ．ＴｏｔａｌｃｅｌｌｕｌａｒＲＮＡｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄａｆｔｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔｆｏｒ３，６ａｎｄ９ｄ，ａｎｄｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲｗａｓａｐｐｌｉｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｒｅｃｅｐｔｏｒａｃｔｉｖａｔｏｒｏｆｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒκＢ（ＲＡＮＫ），ＴＲＡＰ，ｃａｔｈｅｐｓｉｎＫａｎｄｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ（ＭＭＰ）９．ＲｅｓｕｌｔｓＴＲＡＰｓｔａｉｎｉｎｇｓｈｏｗｅｄｔｈａｔ５０ｎｇ／ｍｌＲＡＮＫＬｃｏｕｌｄｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌ

8、ｙｉｎｄｕｃｅＲＡＷ２６４．７ｃｅｌｌｓｉｎｔｏｍｕｌｔｉｎｕｃｌｅａｔｅｄｃｅｌｌｓ（ｎｕｃｌｅａｒ≥１０）．Ａｆｅｗｍｕｌｔｉｎｕｃｌｅａｔｅｄｃ