体外大鼠成骨细胞对破骨细胞形成的影响

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1、体外大鼠成骨细胞对破骨细胞形成的影响【摘要】目的通过将鼠成骨细胞与破骨细胞直接共培养的实验方法，研究成骨细胞对破骨细胞分化及功能成熟的影响。方法按照MCSF30μg/L、RANKL50μg/L的浓度对鼠骨髓单个核细胞诱导培养6d，与原代培养3d的鼠成骨细胞按细胞数量1∶1直接共培养，加入1,25(OH)2D31×10-8mol/L和PGE21×10-6mol/L，利用形态学观察、TRAP染色、骨吸收陷窝检测等方法对共培养细胞进行鉴定。结果成骨细胞与破骨细胞共培养时，成骨细胞有明显的生长优势；染色后显微镜下可见大量呈单层排列的成骨细胞，偶见TRAP(+)

2、的破骨细胞。结论成骨细胞对破骨细胞分化及功能成熟的影响与两者的相对数量有关。本实验中，由于成骨细胞快速生长，当其数量多于破骨细胞时，可能使1,25(OH)2D3对成骨细胞RANKL表达的上调作用不足，且PGE2对成骨细胞OPG表达的下调作用不足，从而主要表现为对破骨细胞形成及分化的抑制作用。【关键词】破骨细胞成骨细胞细胞培养RANKLMCSF　　ABSTRACT:ObjectiveByculturingtheosteoclaststogetherwiththeosteoblastsdirectlytoinvestigatetheeffectofoste

3、oblastsontheformationofmatureosteoclasts.MethodsThebonemarrowmononuclearcellsofratsweretreatedwith30μg/LMCSFand50μg/LRANKLandculturedfor6days13.Subsequently,theprimaryosteoblastswhichwereofthesamequantityastheosteoclastswerecocultureddirectly.Inthecoculturesystem,weaddedtheliqu

4、idcontaining1,25(OH)2D31×10-8mol/LandPGE21×10-6mol/L.Themorphologicalobservation,TRAPstainingandpitstainingwereadoptedtoidentifyosteoclasts.ResultsWhentheosteoclastswerecoculturedwithprimaryosteoblasts,thegrowthofosteoblastshadmorepreponderances.Afterstaining,wecouldseemoreosteo

5、blaststhanosteoclasts.ConclusionTherelationshipbetweenosteoblastsandosteoclastsisrelatedtotherelativequantitiesofthetwocells.Whenosteoblastsoutnumberosteoclasts,osteoblastswouldinhibittheformationanddifferentiationofosteoclasts.　　KEYWORDS:osteoclast;osteoblast;cellculture;RANKL;M

6、CSF　　正畸牙齿移动是伴随着牙槽骨的吸收和形成过程而发生的，牙槽骨的吸收是牙齿移动的第一步，成熟的破骨细胞(osteoclasts,13OC)则是唯一能行使骨吸收功能的细胞[1]。当牙槽骨受到应力或其他刺激因素时，骨组织内发出一定信号，通过骨的微管腔隙传至骨表面的上皮细胞，上皮细胞再将这些信号传达出去，引导外周血中OC的祖细胞向患处定向游动、聚集，大量聚集于此处的破骨细胞前体细胞(preosteoclasts,pOC)与此处的成骨细胞(osteoblasts,OB)接触后开始分化为成熟的OC，并激活该细胞行使骨吸收的功能[24]。OB与OC之间的这种相

7、互作用是与二者的相对数量有关的。因此，本实验拟通过建立OB和OC的直接共培养模型，观察OB对OC分化及功能成熟的调节作用。　　1材料与方法　　1.1实验动物和试剂4周龄SD雄性大鼠2只和出生1-2d的SD大鼠2只均由西安交通大学医学院实验动物中心提供。主要试剂：αMEM培养基由美国GIBCO公司提供；胎牛血清由灏洋生物有限公司提供；细胞分离液Histopaque1083、巨噬细胞集落刺激因子MCSF、破骨细胞分化因子ODF/RANKL、萘酚ASBI磷酸盐、N，N二甲基酰胺均由美国Sigma公司提供。　　1.2玻片及牙本质片的制备将4mm×4mm盖

8、玻片经超声清洗后浸入硫酸重铬酸钾溶液中过夜，充分水洗烤干，高压灭