体外大鼠成骨细胞对破骨细胞形成的影响

《体外大鼠成骨细胞对破骨细胞形成的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、体外大鼠成骨细胞对破骨细胞形成的影响【摘要】目的通过将鼠成骨细胞与破骨细胞直接共培养的实验方法，研究成骨细胞对破骨细胞分化及功能成熟的影响。方法按照MCSF30μg/L、RANKL50μg/L的浓度对鼠骨髓单个核细胞诱导培养6d，与原代培养3d的鼠成骨细胞按细胞数量1∶1直接共培养，加入1,25(OH)2D31×10-8mol/L和PGE21×10-6mol/L，利用形态学观察、TRAP染色、骨吸收陷窝检测等方法对共培养细胞进行鉴定。结果成骨细胞与破骨细胞共培养时，成骨细胞有明显的生长优势；染色后显微镜下可见大量呈单层排列的成骨细胞，偶见TRAP(+)的破骨细胞。结论成骨细胞对破骨细胞分化

2、及功能成熟的影响与两者的相对数量有关。本实验中，由于成骨细胞快速生长，当其数量多于破骨细胞时，可能使1,25(OH)2D3对成骨细胞RANKL表达的上调作用不足，且PGE2对成骨细胞OPG表达的下调作用不足，从而主要表现为对破骨细胞形成及分化的抑制作用。【关键词】破骨细胞成骨细胞细胞培养RANKLMCSF　　ABSTRACT:ObjectiveByculturingtheosteoclaststogetherationofmatureosteoclasts.MethodsThebonemarroononuclearcellsofratsaryosteoblastsequantityasth

3、eosteoclasts,ol/LandPGE21×10-6mol/L.Themorphologicalobservation,TRAPstainingandpitstainingaryosteoblasts,thegroorepreponderances.Afterstaining,oreosteoblaststhanosteoclasts.ConclusionTherelationshipbetberosteoclasts,osteoblastsationanddifferentiationofosteoclasts.　　KEYCSF　　正畸牙齿移动是伴随着牙槽骨的吸收和形成过程而发生的

4、，牙槽骨的吸收是牙齿移动的第一步，成熟的破骨细胞(osteoclasts,OC)则是唯一能行使骨吸收功能的细胞[1]。当牙槽骨受到应力或其他刺激因素时，骨组织内发出一定信号，通过骨的微管腔隙传至骨表面的上皮细胞，上皮细胞再将这些信号传达出去，引导外周血中OC的祖细胞向患处定向游动、聚集，大量聚集于此处的破骨细胞前体细胞(preosteoclasts,pOC)与此处的成骨细胞(osteoblasts,OB)接触后开始分化为成熟的OC，并激活该细胞行使骨吸收的功能[24]。OB与OC之间的这种相互作用是与二者的相对数量有关的。因此，本实验拟通过建立OB和OC的直接共培养模型，观察OB对OC分化及

5、功能成熟的调节作用。　　1材料与方法　　1.1实验动物和试剂4周龄SD雄性大鼠2只和出生1-2d的SD大鼠2只均由西安交通大学医学院实验动物中心提供。主要试剂：αMEM培养基由美国GIBCO公司提供；胎牛血清由灏洋生物有限公司提供；细胞分离液Histopaque1083、巨噬细胞集落刺激因子MCSF、破骨细胞分化因子ODF/RANKL、萘酚ASBI磷酸盐、N，N二甲基酰胺均由美国Sigma公司提供。　　1.2玻片及牙本质片的制备将4mm×4mm盖玻片经超声清洗后浸入硫酸重铬酸钾溶液中过夜，充分水洗烤干，高压灭菌后备用。取因正畸矫治需要拔除的健康牙，去除冠部釉质，冷冻后制备4mm×4

6、mm、厚100-200μm的牙本质片，蒸馏水中超声清洗10min×3次，置于75%(体积分数)乙醇中，4℃保存备用，使用前在超净台中紫外灯照射消毒。　　1.3OC的培养按照常规方法分离出鼠骨髓基质细胞，用αMEM全培养液[含15%(体积分数)胎牛血清、青霉素100u/mL、链霉素100μg/mL]重悬，加入MCSF(10μg/L)，分置于两个25cm2培养瓶中，37℃、5%(体积分数)CO2培养箱内培养24h。24h后，收集细胞悬液，离心，PBS清洗，Histopaque分离液分离单个核细胞，再用αMEM全培养液制备细胞悬液(2×106个细胞/mL)。在两个预置盖玻片的96孔培养板内加入

7、细胞悬液后，每孔中再加入含MCSF30μg/L，RANKL50μg/L的培养液50μL，37℃、5%(体积分数)CO2培养箱内培养备用，每3d换液一次。　　1.4OB的原代培养[5]在OC培养的第3天，取出生后1-2d的SD大鼠2只，拉颈处死后在75%(体积分数)的乙醇溶液中浸泡3-5min。无菌条件下，取颅盖骨(扁骨)，放入DHanks液中。去除骨膜及周围结缔组织，将其置于盛有αMEM全培