烟草浸提液对大鼠体外培养成骨细胞的影响论文

《烟草浸提液对大鼠体外培养成骨细胞的影响论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、烟草浸提液对大鼠体外培养成骨细胞的影响论文王桂龙侯玉东石玲波【摘要】目的探索烟草浸提液对体外培养成骨细胞的附着和生长的影响。方法将周龄SD大鼠颅盖骨，剪成1.5mm×1.5mm大小组织块，先用0.25％胰蛋白酶消化20min、0.1％Ⅱ型胶原酶消化30min后，再对其进行培养。倒置显微镜观察细胞形态，并对其碱性磷酸酶(ALP)活性及矿化能力进行鉴定。实验分对照组和实验组，实验组按所加烟草浸提液浓度的不同分为0.8、1.6、3.2、6.4、12.5、25和50g／L7个浓度组，分别测定各实验组细胞的生长曲线

2、。采用SPSS13.0软件包对数据进行双因素方差分析。结果烟草浸体液对成骨细胞的附着和生长起抑制作用，并随其浓度的升高而增强。各处理组间存在显著差异（P＜0.01）；各组内的前3d存在显著性差异（P＜0.01）.freelokelesstobaccoextract(ST)ontheattachmentandgrothecalvariainratsaged1m×1.5mm.Theyinutesandby0.1％collagenaseIIfor30minutesandthentheliquidsupernat

3、antorphology,histochemicalstainingofalkalinephosphatase(ALPase)andcalcifiednodulesstaining.Theexperimentsentgroups.Theexperimentgroupsokelesstobaccoextract’sconcentration:0.8,1.6,3.2,6.4,12.5,25and50g／L,thenthecellgroedusingSPSS13.0softentandgroanner.The

4、differenceamongallofgroupsegroupong3.250g／Lgroupsokingisharmfultotheclinichealingoforalimplantoperation.【Keyaryculture,rats,smokelesstobaccoextract目前，口腔种植技术因其独特的优势而获得了临床医师及患者的青睐，而骨结合则是其成功的基础。骨组织作为一种特殊的钙化组织，主要由成骨细胞完成并受体内多种因素调控。随着细胞培养技术的发展，成骨细胞的体外培养成为可能。体外

5、培养的成骨细胞可以排除体内多种因素的相互影响，从而为骨形成和代谢机理方面的研究提供有价值的实验依据。目前成骨细胞原代培养的方法主要有2种：酶消化法和组织块法［1,2］。酶消化法虽可获得大量细胞，但获得的细胞不纯。本实验拟采用酶消化后再对组织块进行培养的方法来获得纯度较高的成骨细胞，观察烟草浸提液对成骨细胞的附着及生长的影响，以期证明吸烟是影响口腔种植的不利因素之一。1材料和方法1.1器材和试剂1.1.1主要仪器设备和材料:超净工作台(苏州集团安泰公司)；CO2培养箱(Heraeus)；荧光倒置显微镜(日本

6、OLYMLOS)；眼科手术器械（上海手术器械厂）；血球计数板（镇江市丹徒科达医疗用品厂）；50ml玻璃培养瓶（Costar）；离心机（雷动尔LDZ52）；高糖DMEM（Ｇibco）；胰蛋白酶（Amresco）；胎牛血清（杭州四季青生物工程材料研究所）；胶原酶（Invitrogen）；烟草（成品盒装香烟，烟气烟碱量1.2mg，焦油量13mg）；SD大鼠（烟台绿叶实验动物中心）。1.1.2主要试剂的配制:①含烟草浸提液培养液的配制［3］:称取5g成品盒装香烟的烟丝，加入0.1L的双蒸水，在37℃孵育箱中浸泡

7、48h，过滤除菌，将此浓度定为50g／L。用含15ml／L胎牛血清的DMEM培养液配制含烟草浸提液的培养液，其浓度分别为0.8、1.6、3.2、6.4、12.5、25和50g／L7个浓度组。②成骨细胞矿化培养液的配制:DMEM培养基中加入双抗(含青霉素100U/ml、链霉素100U/ml)、10%胎牛血清、Na2CO3。含矿化液的DMEM培养基中加入双抗(含青霉素100U/ml、链霉素100U/ml)、10%胎牛血清、Na2CO3、β甘油磷酸钠1×10-2mol/L、维生素C50mg/ml、地塞米松1×

8、10-7mol/L。孵育液含3%β甘油磷酸钠5ml，2%巴比妥钠5ml，2%硝酸钙10ml，2%MgSO45ml，蒸馏水25ml。1.2实验方法1.2.1大鼠成骨细胞的原代培养：周龄SD大鼠处死后用75％酒精浸泡5min，倒置显微镜下取其颅顶骨，以无菌DHanks(含青霉素100U/ml、链霉素100U/ml)冲洗，刮去骨膜、剪去骨缝间结缔组织，制成约1.5mm×1.5mm大小的碎块，以DHanks液冲洗3次，加入0.2