mir-221表达水平与肝癌分期、分型及预后的相关性研究

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1、分类号：R73密级：不保密UDC：610学校代码：11065博士专业学位论文miR-221表达水平与肝癌分期、分型及预后的相关性研究韩春山指导教师梁军教授学科专业名称肿瘤学论文提交日期2015年10月15日论文答辩日期2015年11月25日答辩委员会主席王秀问miR-221表达水平与肝癌分期、分型及预后的相关性研究中文摘要目的：原发性肝细胞癌(Hepatocellularcarcinoma，HCC)是发病率较高的恶性肿瘤之一，寻找肝癌发生发展的相关基因，可为肝癌的诊断、治疗提供理论基础。microRNA(miRNA)是一类长度为18-22nt的内源性非编码小RNA，被证

2、明与肝癌的发生息息相关，其生物效应是在转录阶段抑制相关基因的表达。本研究应用实时荧光定量PCR的方法检测肝癌组织中miR-221的表达水平，并统计分析miR-221表达量与HCC患者的分期、分型及预后等临床资料的关系。在此基础上进一步观察阻断miR-221表达后的肝癌细胞的生物学特性的改变。方法：收集246例肝癌患者肿瘤及周围非瘤组织手术标本，运用实时荧光定量PCR技术检测miR-221的表达水平。根据miR-221在肝癌组织中的表达水平，将HCC患者分为miR-221高表达组和低表达组，分析miR-221表达量与HCC患者临床资料之间的关系。设计miR-221反义链，

3、通过慢病毒载体转染肝癌细胞株，以CCK-8、克隆形成、划痕实验、Transwell、流式细胞周期检测等观察阻断miR-221表达后的肝癌细胞的生kip1kip2物学特性。Westernblot检测阻断MiR-221对细胞周期调节蛋白p27、p57的影响。结果：miR-221表达水平与肿瘤病理学分级(P=0.0001)、TNM分期(P=0.03)、门静脉癌栓(P=0.001)、甲胎蛋白（P=0.007)、淋巴结转移(P=0.001)密切相关，但与年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤数量、包膜形成等无关，miR-221高表达与HCC患者总体生存期负相关，COX回归生存分析结果显示mi

4、R-221是判断HCC患者预后的一个独立预测因子。阻断miR-221的表达并能够有效地抑制肝癌细胞的增殖活动，也能够阻止其克隆形成及迁移侵袭的能力。流式细胞周期检测发现阻断miR-221的表达可以诱导肝癌细胞发kip2kip1生G1期阻滞。阻断miR-221的表达导致肝癌细胞中p57、p27蛋白表达量显著增高。结论：miR-221在HCC中表达水平升高，与HCC的发生发展具有密切关系，是HCC患者预后的一个负性独立预测因子。阻断肝癌细胞中miR-221的表达将为肝癌的诊断、治疗提供新的靶点。关键词：肝细胞癌；微小RNA；miR-221；相关性；Relationshipo

5、fmiR-221expressionwiththestage,typeandprognosisofHepatocellularcarcinomaAbstractAim：Hepatocellularcarcinoma(HCC)isacommonmalignantcancerinourcountryandscreeningrelatedgenesfunctionedinHCCgenesisanddevelopmentmaygivesomebasistodiagnosisandtreatmentofthisdisease.microRNA(miRNA)isakindofint

6、rinsic,18-22ntlong,non-codingRNA.Itfunctionsitsbiologicalrolesbyinhibitingexpressionoftargetgenesonpost-transcriptionallevel.StudiesshowedthatmiRNAmaycorrelateswithHCCgenesisanddevelopment.ThepresentstudytestedtheexpressionofmiR-221inHCCtissuesusingqPCR,andthenstatistictherelationshipofm

7、iR-221expressionwiththestage,typeandprognosisofHepatocellularcarcinoma.WefurtherinvestigatedthechangeonbiologicalcharactersofHCCcellsafterblockingtheexpressionofmiR-221.Methods：Aftercollected246casesofHCCandpairedparatumortissues,wetestedtheexpressionofmiR-221usingqPCRand