fbxo8通过泛素化gstp1参与结直肠癌侵袭和转移的分子机制

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1、分类号密级ＵＤＣ编号硕壬学位论文ＦＢＸ０８通过泛素化ＧＳＴＰ１参与结直肠癌侵袭和转移的分子机制ＴｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＦＢＸ０８ｉｎｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｉｓｂｙｔａｒｇｅｔｉｎｇＧＳＴＰｌｆｏｒｕｂｉｕ出ｎｍｅ化ａｔｅｄｄｅｒａｄａｔｉｏｎｑｇ吴平香导师姓名Ｔ彥青教授梁莉教授专业名称病理学与病理生理学培养类型学术型论文提交日期２０１５年５月

2、南方医科大学２０１２级硕壬学位论文ＦＢＸ０８通过泛素化ＧＳＴＰ１参与结直肠癌侵袭和转移的分子机制＊ＴｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＦＢＸ０８ｎｃｏｌｏｉｅｃ化１ｃａｎｃｅｒｉｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｉｓｂｙｔａｒｇｅ村ｎｇＧＳＴＰｌｆｏｒｕｂｉｑｕｉｔｉｎｍｅｄｉａｔ；ｅｄｄｅｒａｄａｔｉｏｎｇ课题来源：自选学位申请人吴平香导师姓名了度青教授；梁莉教授专业若称病理学与病理生理学培养类型学术型培养层次硕壬研究

3、主所在学院基础医学院答辩委貢会主席教授答辩委Ｉ会委员教授式袭讓＾作绛气ｆ為私裝《若＾２０１５年５月２１日广州硕壬学位论文ＦＢＸ０８通过浸素化ＧＳＴＰ１参与结直肠癌侵袭和转移的分子机制硕±研究生：吴平香指导老师：Ｔ彦青教授梁莉教授摘要研究目的与背景在全球范围恶性肿瘤发病率中，结直肠癌发病率位居第Ｈ，仅次于肺癌与Ｗ乳腺癌。且在结直肠癌确诊时，部分病人己发生远处转移，从而错失了手术的Ｗ黄金时期。而发生远处转移的病人普遍生存率低且预后不良。结直肠癌的发病

4、给病人家庭及社会造成沉重的负担，因此研究结直肠癌发生发展及其转移的相关分子化制，对结直肠癌转移进行早期诊断与治疗，对降低病人痛苦、提高生存率具有重要的意义。泛素酶体系统由Ｅ１（泛素激活酶）、Ｅ２（泛素结合酶）、Ｅ３（泛素连接酶）Ｗ－组成，共同参与蛋白的泛素化修饰从而被水解或失活。Ｆｂｏｘ家族属于泛素蛋白酶体系统Ｅ３（泛素连接酶）的成员，其主要参与蛋白的泛素化降解从而调控细胞的增殖一、调亡、代谢、运动及损伤修复等，参与几乎机体的切生命活动，－－调控机体的稳态。Ｆｂｏｘ家族主要由王类Ｆ

5、ｂｏｘ蛋白组成：Ｆｂｌｓ、Ｆｂｗｓ、Ｆｂｘｓ，－ｂｏｘ其中Ｆｂｌｓ蛋白组成成员有１２个，，为Ｆ家族最大的组成成员其新成员包括３一［］３－ＦＢＬ、ＦＢＬ７。ＦＢＸ０８（Ｆｂｏｘｐｒｏｔｅｍ８，又名ＦＢＸ８）为Ｆｂｘｓ家族的个新成ＦＢＸ０８在肿瘤中ＦＢＸ０８为新的Ｃ－ｍｃ员，目前关于的报道较少，ｙ结合蛋白，Ｗ－ｃ８Ｃｍｙ通过抑制郎Ｘ０而促进细胞的侵袭。乳腺癌中ＦＢＸ０８的异常表达引Ｗ起其参与Ａｒｆ６的泛素化异常而促进乳腺癌细胞的侵袭。本课题组前期研究表Ｉ摘要明ＦＢＸ０８在肝癌组织中

6、低表达且抑制肝癌细胞的增殖与侵袭能力，可能成为临Ｗ床治疗肝细胞癌的有效铅点。由此可见，ＦＢＸ０８与肿瘤发展与侵袭转移关系密切。本课题选取ＦＢＸ０８泛素化作用为切入点，通过筛选ＦＢＸ０８的下游的泛素化鞭蛋白探讨其相关的结直肠癌发生发展机制。主要内容如下：ＩＦＢＸ０８的下，筛选游泛素化祀蛋白；２，探讨ＦＢＸ０８与说巧１的相互作用关系，证实ＦＢＸ０８对ＧＳＴＰ１的泛素化作用；３，探讨ＧＳＴＰ１在ＦＢＸ０８诱导结直肠癌侵袭转移中的作用；４，明确ＧＳＴＰ１在结直肠癌侵袭转移中的表达及对结直肠癌细

7、胞生物学行为的影响。本课题目的为探讨ＦＢＸ０８在结直肠癌侵袭转移中的机制研究，为临床结直肠癌的治疗提供祀点。研究方法１、ＦＢＸ０８下游泛素化祀蛋白的筛选－（１）构建ＦＢＸ０８过表达质粒，转染进人胚胎肾细胞株２９３Ｔ之后ｑＲＴＰＣＲｅｓｔｅｍ－与ＷＢｌｏｔ实验验证其转染效率。（２）ＩＰ（Ｉｍｍｕｎｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ）实验分离出ＦＢＸ０８的结合蛋白后，运用质。谱分析技术将结合蛋白进行狀段分析，得出可能的ＦＢＸ０８下游泛素化祀蛋白２、探讨ＦＢＸ０８与ＧＳＴＰ１的相互作用关系

8、ＦＢＸ０８对ＧＳＴＰ１的泛素，证实化作用（ｃｏ－ｃｏ－ｍｍｕｎｏｅｃｔａｔｏｎ１）运用ＩＰ（Ｉｐｒｉｐｉｉ）与免疫炎光共聚焦实验，检测ＦＢＸ０８与ＧＳＴＰ１的结合情况。（２）用蛋白酶体抑制剂ＭＧ１３２处理结直肠癌细胞ＳＷ６２０和ＳＷ６２０／ＦＢＸＯ８，－ＢＷｅｓｔｅｍｌｏｔ检测ＧＳＴＰ１的蛋白含量