fhl2参与调节klf8促进结直肠癌侵袭转移机制的研究

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1、分类号密级ＵＤＣ编号？徊Ｉ似嫁硕壬学位论文ＦＨＬ２参与调节ＫＬＦ８促进结直肠癌侵袭转移机制的研究ＫＬＦ８ｒｏｍｏｔｅｓｔｕｍｏｒｉｅｎｅｓｉｓ，ｉｎｖ化ｉｏｎａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｉｓｏｆｐｇｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｂｙｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＦＨＬ２严清青导师姓名王继德巧授刘思德教授专业名務内科学（消化系病）培养类型学术型论文提交日期２０１５年３月南方医科大学２０１２级硕击学位

2、论文ＦＨＬ２参与调节ＫＬＦ８促进结直肠癌侵袭转移机制的研究ＫＬＦ８ｒｏｍｏｔ的ｔｕｍｏｒｉｅｎｅｓｉｓ，ｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄｍｅ化ｓｔａｓｉｓｏｆｐｇｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎ说ｒｃｅｌｌｓｂｙ化ａｎｓｃｒｉｔｉｏｎａｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｐＦＨＬ２课题来源：国家自然科学基金资助项目（８１２７２７６１）国家自然科学基金资助项目（８１１７２０５７）南方医院院长基金（２０１２Ｂ００９）南方医院院衣基金（２０１３Ｚ００８）学位申请人严清青导师姓名王继德教授刘思德教授专业

3、若称内科学（消化系病）培养类型学术型培养层次全日制硕壬研究生所在学院第一临床医学院答辩主席曾志荣教授答辩委员岳辉教授张北平教授杨定华教授白说教授２０１５年３月２０日广州硕去学位论文ＦＨＬ２参与调节化巧促进结直肠癌侵袭转移机制的研究硕古研巧生：严清青指导老师：王继德教授刘思德教授摘要目的和意义ＦＨＬ２（ＦｏｕｒａｎｄａｈａｌｆＬＩＭＰｒｏｔｅｉｎ２）为确定的癌基因，在胃肠道肿瘤的发生发展过程中起着重要的作用。最近已有研究报道了ＦＨＬ２下游的

4、转录调控，但其上游的相关调控报道甚微。结合文献，我们通过软件筛选出转录因子ＫＬＦ８－ｅ－（Ｋｍｅｌｌｉｋｆａｃｔｏｒ８）为ＦＨＬ２可能的调控因子。Ｋｒｕｐｐｅｌｌｉｋｅｆａｃｔｏｒ８（ＫＬＦ８）ｐｐ一是作为Ｋｒａｐｐｅｌ样Ｃｙｓ２／Ｈｉｓ２锋指转录因子蛋白质家族的个转录抑制蛋白而被。识别的，通过与辅抑制子碳端结合蛋白（Ｃ化Ｐ）相联系抑制基因表达最近有研究表明ＫＬＦ８在卵巢癌、肾癌Ｗ及乳腺癌中表达是升高的，但是在肠癌组织细胞中的表达及其与肠癌发生、侵袭转移尚无相关报道。同时本课题旨在明确ＫＬＦ８与ＦＨ

5、Ｌ２上游启动子序列的转录调控关系，从而寻找能靴向调控ＦＨＬ２表达的元件，Ｗ期应用于肿痛的生物祀向治疗。材稱和施主要材料ｏ－Ｌｏｖ、ＳＷ４８０、ＳＷ１１１６、Ｃａｃｏ２、ＳＷ６２０、ＨＴ２９和ＤＬＤ１细胞，ｒＴＧＦｐｉ、－ＴＧＦｐｉ中和抗体、双费光素酶报告基因检测试剂盒、ＣＨＩＰ试剂盒、突变试剂盒、ＫＬＦ８抗兔多克隆抗体、ＦＨＬ２抗鼠多克隆抗体、罗丹明标记鬼笔环化。主要旅１．ＫＬＦ８对麻癌ＥＭＴ及侵袭转移的影响Ｉ摘要１．１ＫＬＦ８过表达稳定株的构建及ＫＬＦ８对肠癌ＥＭＴ的影响ＣＤＮ

6、Ａ３－转染Ｐ．１ＫＬＦ８和对照ＰＣＤＮＡ３．１质粒到Ｌｏｖｏ细胞，４８小时后用含有６００ａ／ｍｌＧ４（／ｍｌＧ４１８ｇ１８的培养基继续培养２周，挑选单克隆细胞，并用８％ｇ｜培养基继续培养，建立单克隆稳定表达株，ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ验证稳定克隆细胞中ＫＬＦ８的表达－情况。ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测转染ＰＣＤＮＡ３．１ＫＬＦＳ和对照ｐｃＤＮＡｌｌ质－－粒细胞中的Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ、Ｖｉｍｅｎｔｉｎ及Ｎｃａｄｈｅｎｒｉｎ的表达情况。１．２ＫＬＦ８对肠癌细胞侵袭转移的影响接种适当密度转染ＣＤＮＡ３－ＣＰ．１ＫＬＦ８

7、和对照ＰＤＮＡ３．１质粒细胞至６孔板中，待融合度近１００％时，，用移液器枪头进行划痕，镜下记录划痕区相对距离维续培养，分别于１２和２４小时再次拍照记录，评估肠癌细胞的转移能力；种转染ＰＣＤＮＡ３．１－ＫＬＦ８和对照ｃＤＮＡｌｌ质粒的单细胞悬液（５ｘｌ〇Ｖ室）至ｐＭａｔｒｉｇｅｌ侵袭小室，室内为无血清培养基，室外为１０％胎牛血清培养基，常规培养２４小时，化２％结晶紫染色，显微镜下计数发生侵袭的细胞数量，评价高表达ＫＬＦ８对细胞侵袭能力的影响。ｒ－１．３ＴＧＦｐｌ对ＫＬＦ８及ＥＭＴ的影响－ｗｅｓｔｅｍ

8、ｂｌｏｔ检测不同浓度０、０．５、１．０、２．０ｎ／ｍｌ）订ＧＦ３１处理Ｌｏｖｏ细（ｇ（８－－胞后蛋白中ＫＬＦ、Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ和ｖｉｍｅｎｔｉｎ的表达。用含有２ｉ／ｍｌＴＧ