bdnf对高糖状态下海马神经元保护作用的实验研究

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1、上海交通大学硕士学位论文BDNF对高糖状态下海马神经元保护作用的实验研究学生姓名：朱奕潼学号：1127259540指导教师：钟远教授学科专业：老年医学研究方向：认知功能障碍申请学位：硕士培养单位：上海交通大学附属第六人民医院上海交通大学医学院2015年4月ShanghaiJiaoTongUniversityMasterDisserationProtectiveeffectsofBDNFonhippocampalneuronsunderhighglucoseconditionAuthor:ZhuYi-tongStu

2、dentNO:1127259540Advisor:Prof.ZhongYuanSpecialty:GeriatricsResearchField:CognitiveDeclineDegree:MasterInstitution:ShanghaiJiaoTongUniversityaffiliatedSixthPeople'sHospitalSchoolofMedicineShanghaiJiaoTongUniversityApril,2015学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，

3、独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密

4、□，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于上海交通大学硕士学位论文BDNF对高糖状态下海马神经元保护作用的实验研究摘要第一部分糖尿病脑病大鼠海马组织中BDNF、CREB、Arc的表达与认知功能改变的关系目的观察糖尿病大鼠认知功能与海马突触可塑性密切相关的蛋白表达之间的关系，包括脑源性神经营养因子（BDNF）、cAMP反应元件结合蛋白（CREB）及活性调节细胞骨架相关蛋白（Arc），探讨以上因子在糖尿病脑病（DE）发病机制中的作用。方法30只SPF级雄性8周龄SD大鼠，随机分为对照组和糖尿病组，糖尿病组高脂饮食喂养

5、4周后腹腔注射链脲佐菌素（STZ，30mg/kg）建立2型糖尿病（T2DM）大鼠模型，检测动物在不同时间段的体质量、空腹血糖（FBG）、空腹血清胰岛素（FSI），并计算胰岛素敏感指数（ISI）。实验末行水迷宫测试评估两组大鼠认知功能，酶联免疫吸附法检测大鼠海马组织β淀粉样蛋白的浓度，免疫组织化学法观察Aβ的表达，蛋白质印迹法检测大鼠海马组织BDNF、CREB、Arc和β淀粉样蛋白（Aβ）的表达。结果糖尿病大鼠空腹血糖和空腹血清胰岛素高于对照组，体重低于对照组（均p<0.001）。糖尿病组大鼠在目标象限的探索时间较

6、对照组缩短（P＜0.01），原平台穿越次数较对照组减少（P＜0.01）。糖尿病组大鼠海马组织Aβ的表达较对照组升高（P＜0.01），BDNF、CREB、磷酸化CREB（pCREB）和Arc的表达均降低（均P＜0.01）。结论T2DM可诱发DE，DE大鼠海马组织Aβ沉积增多，空间记忆等认知功能受损，其发生机制可能是Aβ的异常沉积干扰BDNF诱导Arc蛋白的表达，引起突触可塑性失衡，从而导致认知损伤。I上海交通大学硕士学位论文第二部分BDNF通过PI3K-Akt-mTOR通路对高糖培养海马神经元的保护效应目的建立高糖

7、状态下海马神经元细胞模型，探讨外源性BDNF对高糖状态下海马神经元的保护效应，以及可能的细胞内信号传导机制，为BDNF潜在的临床应用价值提供理论依据。方法以25、50、75、100mmol/L不同浓度葡萄糖分别作用于原代培养的SD新生鼠海马神经元24、48、72、96h，采用CCK8细胞增殖法检测神经元的存活率，确定葡萄糖的最佳干预浓度及时间，建立原代培养的大鼠海马神经元高糖模型。予以50ng/mL浓度BDNF干预高糖状态下海马神经元96h后，采用流式细胞仪检测正常对照组、高糖组和高糖+BDNF组神经元凋亡率；采

8、用WesternBlotting法检测5个不同组（正常对照组，高糖组，高糖+BDNF组，高糖+BDNF+wortmannin组和高糖+BDNF+rapamycin组）中酪氨酸激酶受体B（TrkB）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（pAkt）、CREB、磷酸化CREB（pCREB）、Arc、突触素（Syn）的表达水平。结果75mmol/L葡萄糖浓度培养72小时神经元OD