bdnf对aβ致伤大鼠海马神经元突触功能修复的影响

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1、HEILONG~ANGMEDICINEANDPHARMACYDec．2013，Vo1．36No．6·7·BDNF对Ap致伤大鼠海马神经元突触功能修复的影响冯旭．黄昕艳．江清林．赵锦程(佳未斯大学神经科学研究所，黑龙江佳未斯154oo7)旦璧凳竺犁塑至孝。．塑专壁的期大窒磐倒置相差显微镜下观察，培养至第5天神经元胞体进一擎突壁暨疃皇。AB窭箜步增大，突起继续粗增，l莱分明孟苫菱至．．窒二套触堡墨垫里孽三在神经．覆损伤修墨t乙塑妻摹零展粤童三佳第第79天天神粹经经元元生发长育旺成盛氨，，胞亘体菌大，綦

2、突起：苌不，分枝蓬囊末连,I)2A[31-42聚擎算体夕爹均，神经元个体难以分出。NSE免煮细益。，触蛋：白翌神壅经攫凰磐蓬，搴．，BDNF对．A．B致伤笔霆窒鸯及突经元胞浆内可觅棕簧色阳性颗冕(Neuo，g：。、，塑烹(．疫反应；经阳性并薮，芫纯N⋯9o％⋯~2~～o～一⋯．modulin,治⋯疗～提⋯供～N实m验警依据影响。为阿尔海默茨病突触损伤机制及2．2不同浓度1-⋯42箍神磊生存率、凋亡率的。髟晌’。⋯。一’一一⋯’1．1实验材料大，突起长，轴突远端生长锥染色明显。与正常对照组相比，新生

3、24h内sD大鼠，由佳木斯大学实验动物中心提供21．tmol／LAl31—42、5Ixmol／LAIM一42组着色细胞无明显减(动物质量合格证号：黑动字第99102001)。AIM一42(Sigma少，轴突生长锥染色少；1Opmol／LAIM一42组着色细胞减少，公司)；Caspase一3免疫组化试剂盒(武汉博士德公司)；山羊被染色的细胞多为胞体较小，突起较短；20pmol／LA[31—42抗小鼠IgG(trite)、山羊抗兔Igcl：兀TC)(santaCruz公司)。组细胞明显减少，残存细胞胞

4、体小，突起断裂、消失。随着1．2方法AIM一42浓度的增加，神经细胞生存率逐渐降低，1O、取2Ah内新生sD大鼠，暴露大脑半球双侧海马，用镊子201~mol／L，Apl一42孵育24h的神经细胞生存率明显降低夹取海马放入预冷的DMEM／FI2一倍液中漂洗2—3次。胰(P<0。05、P<0．01)。凋亡神经元胞体明显缩小，折光性酶消化，将消化后的组织液用2o0目筛网过滤去除脑膜及纤下降或消失，突起开始回缩，分枝连接出现大面积回缩断裂，维组织。离心弃上清，加入DMEM／FI2完全培养液制成单细胞周围光

5、晕消失，细胞呈点状散在分布。随着AI31—42浓细胞悬液，接种于24孔板中置37℃、5％的CO：培养箱中培度的增加，神经细胞凋亡率逐渐上升，凋亡神经元胞体明显养，每3天半量换液一次，每7—8天传代一次，每天连续观缩小，折光性下降或消失，突起开始回缩，分枝连接出现大面察细胞生长情况及细胞形态。并拍照观察细胞生长情况。海积回缩断裂。细胞周围光晕消失，细胞呈点状散在分布，1O、马神经元细胞鉴定。将培养7d的海马神经细胞分为5组，20t~mol／LA[31—42孵育24h的神经细胞凋亡率明显升高加入AB1

6、—42，使其终浓度分别为：A组(对照组)0t~nol／L；(P<0．05、P<0．01)。见表1，图1—3。B组2ttmol／L；C组5ttmol／L；D组10~mol／L；E组20~aol／L，继续培养，制备Apl-42诱导原代海马神经细胞建立阿尔茨海默病细胞模型。MTr法测细胞存活率，TUNEL法测定细胞凋亡率。正常海马神经细胞作为正常对照组，lOpmol／LAIM一42致伤海马神经细胞作为模型组。模型组分为BDNF低、中、高剂量组和空白对照组，每组分别加入BDNF至5ng／mL、20ng／m

7、L、lOOn~／mL、0n~／mL终浓度。分别以Ng、Nm为一抗，行免疫荧光细胞化学染色，激光共聚焦显微镜下，采集图像，测定神经元树突Ng和轴突Nm的平均荧光强度值。1．3统计学处理采用SPSS13．0统计软件进行单因素方差分析，各组数据均以均数±标准差(±s)表示，P<0．05表示差异有统图l大鼠海马神经细胞原代培养7dNSE鉴定计学意义。(免疫细胞化学，DAB显色，×100)·lO·黑龙江医药科学2013年12月第36卷第6期28(19)：2859—2860[9]AntonE，Marchion

8、niM，IceK，et丑1．RoleofGGF／neuregulinsigns-￡6]VanDamEJ，RuiterB，x∞l8lA，eta1．N—methy一1D—aspaxtate—lingininteractionsbetWeenmigratingneu_vor~andradial_minthein—ducedIonS—tenndepressionisassociatedwithadecreaseindevelopingcerebralc0懈[J]．Development，1