bdnf对aβ致伤大鼠海马神经元突触功能修复的影响

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1、HEILONG~ANGMEDICINEANDPHARMACYDec.2013,Vo1.36No.6·7·BDNF对Ap致伤大鼠海马神经元突触功能修复的影响冯旭.黄昕艳.江清林.赵锦程(佳未斯大学神经科学研究所,黑龙江佳未斯154oo7)旦璧凳竺犁塑至孝。.塑专壁的期大窒磐倒置相差显微镜下观察,培养至第5天神经元胞体进一擎突壁暨疃皇。AB窭箜步增大,突起继续粗增,l莱分明孟苫菱至..窒二套触堡墨垫里孽三在神经.覆损伤修墨t乙塑妻摹零展粤童三佳第第79天天神粹经经元元生发长育旺成盛氨,,胞亘体菌大,綦

2、突起:苌不,分枝蓬囊末连,I)2A[31-42聚擎算体夕爹均,神经元个体难以分出。NSE免煮细益。,触蛋:白翌神壅经攫凰磐蓬,搴.,BDNF对.A.B致伤笔霆窒鸯及突经元胞浆内可觅棕簧色阳性颗冕(Neuo,g:。、,塑烹(.疫反应;经阳性并薮,芫纯N⋯9o%⋯~2~~o~一⋯.modulin,治⋯疗~提⋯供~N实m验警依据影响。为阿尔海默茨病突触损伤机制及2.2不同浓度1-⋯42箍神磊生存率、凋亡率的。髟晌’。⋯。一’一一⋯’1.1实验材料大,突起长,轴突远端生长锥染色明显。与正常对照组相比,新生

3、24h内sD大鼠,由佳木斯大学实验动物中心提供21.tmol/LAl31—42、5Ixmol/LAIM一42组着色细胞无明显减(动物质量合格证号:黑动字第99102001)。AIM一42(Sigma少,轴突生长锥染色少;1Opmol/LAIM一42组着色细胞减少,公司);Caspase一3免疫组化试剂盒(武汉博士德公司);山羊被染色的细胞多为胞体较小,突起较短;20pmol/LA[31—42抗小鼠IgG(trite)、山羊抗兔Igcl:兀TC)(santaCruz公司)。组细胞明显减少,残存细胞胞

4、体小,突起断裂、消失。随着1.2方法AIM一42浓度的增加,神经细胞生存率逐渐降低,1O、取2Ah内新生sD大鼠,暴露大脑半球双侧海马,用镊子201~mol/L,Apl一42孵育24h的神经细胞生存率明显降低夹取海马放入预冷的DMEM/FI2一倍液中漂洗2—3次。胰(P<0。05、P<0.01)。凋亡神经元胞体明显缩小,折光性酶消化,将消化后的组织液用2o0目筛网过滤去除脑膜及纤下降或消失,突起开始回缩,分枝连接出现大面积回缩断裂,维组织。离心弃上清,加入DMEM/FI2完全培养液制成单细胞周围光

5、晕消失,细胞呈点状散在分布。随着AI31—42浓细胞悬液,接种于24孔板中置37℃、5%的CO:培养箱中培度的增加,神经细胞凋亡率逐渐上升,凋亡神经元胞体明显养,每3天半量换液一次,每7—8天传代一次,每天连续观缩小,折光性下降或消失,突起开始回缩,分枝连接出现大面察细胞生长情况及细胞形态。并拍照观察细胞生长情况。海积回缩断裂。细胞周围光晕消失,细胞呈点状散在分布,1O、马神经元细胞鉴定。将培养7d的海马神经细胞分为5组,20t~mol/LA[31—42孵育24h的神经细胞凋亡率明显升高加入AB1

6、—42,使其终浓度分别为:A组(对照组)0t~nol/L;(P<0.05、P<0.01)。见表1,图1—3。B组2ttmol/L;C组5ttmol/L;D组10~mol/L;E组20~aol/L,继续培养,制备Apl-42诱导原代海马神经细胞建立阿尔茨海默病细胞模型。MTr法测细胞存活率,TUNEL法测定细胞凋亡率。正常海马神经细胞作为正常对照组,lOpmol/LAIM一42致伤海马神经细胞作为模型组。模型组分为BDNF低、中、高剂量组和空白对照组,每组分别加入BDNF至5ng/mL、20ng/m

7、L、lOOn~/mL、0n~/mL终浓度。分别以Ng、Nm为一抗,行免疫荧光细胞化学染色,激光共聚焦显微镜下,采集图像,测定神经元树突Ng和轴突Nm的平均荧光强度值。1.3统计学处理采用SPSS13.0统计软件进行单因素方差分析,各组数据均以均数±标准差(±s)表示,P<0.05表示差异有统图l大鼠海马神经细胞原代培养7dNSE鉴定计学意义。(免疫细胞化学,DAB显色,×100)·lO·黑龙江医药科学2013年12月第36卷第6期28(19):2859—2860[9]AntonE,Marchion

8、niM,IceK,et丑1.RoleofGGF/neuregulinsigns-£6]VanDamEJ,RuiterB,x∞l8lA,eta1.N—methy一1D—aspaxtate—lingininteractionsbetWeenmigratingneu_vor~andradial_minthein—ducedIonS—tenndepressionisassociatedwithadecreaseindevelopingcerebralc0懈[J].Development,1

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