褪黑素对ptz致痫大鼠海马神经元凋亡的影响

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1、褪黑素对PTZ致痫大鼠海马神经元凋亡的影响【摘要】目的探讨褪黑素对癫痫发作中细胞凋亡的影响。方法将24只成年T组；PTZ组和MT组腹腔注射PTZ(60mg/kg)，诱导癫痫发作，NC组腹腔注射等量生理盐水。MT组按体重10mg/kg于注射PTZ之前20min、立即、后1h、后2h分别经腹腔注射MT并观察1h，PTZ组于相同时间注射生理盐水。然后处死大鼠取脑，应用免疫组织化学的方法检测海马神经元Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果大鼠海马神经元Bax的改变：PTZ组明显高于NC组，MT组明显低于PTZ组，但高于NC组：大鼠海马神经元Bcl-2的改变：PT

2、Z组明显高于NC组，MT组明显高于PTZ组，也高于NC组。结论MT可以通过增强海马神经元Bcl-2的表达和降低Bax的表达而对抗癫痫中细胞的凋亡。【关键词】褪黑素；癫痫；戊四氮；Bax；Bcl-2【Abstract】ObjectiveToexploretheeffectofmelatoninonbcl-2andbaxofhippocampusinseizuresratsinducedbyPTZ.MethodsTlydividedintothreegroups，NCgroup，PTZgroupandMTgroup.AdoseofPTZ(60mg/kg)

3、inisterededoseofnormalsaline.TheratsofMTgroupinisteredintraperitoneallyg/kg)in20minutebeforeinjectingPTZ，atonetime，1and2hourafterinjection.SimultaneouslythesamedoseofnoramlsalineinisteredintraperitoneallyonPTZgroup.Theratsmunoreactivityofneruononhippocampusbyusingimmunohistoche

4、mistrymethod.ResultsThenumberandopticaldensityofBaxinhippocampusofPTZgroupratsberandopticaldensityofBaxinhippocampusofMTgroupratsberandopticaldensityofBcl-2inhippocampusofPTZgorupratsberandopticaldensityofBcl-2inhippocampusofMTgroupratspusneruonbyincreasedtheexpressionofBcl-2an

5、ddecreasedtheexpressionofBax.【Keyelatonin；seizure；pentyleetrazole；bax；bcl-2难治性癫痫是神经系统的常见病，发病机制至今没有完全阐明，癫痫长期发作可能造成患者的智力和认知发生改变，给社会和家庭带来沉重的负担。大量动物实验发现癫痫发作后中枢神经系统存在细胞凋亡，临床癫痫病人也大多有海马硬化存在。褪黑素(Melatonin，MT)是松果体分泌的神经内分泌激素，它对人体的作用非常广泛，近年研究发现它具有抗癫痫发作的报道［1］，但是它是否对癫痫发作后神经细胞的凋亡具有保护作用研究较少，本

6、实验旨在通过观察MT对戊四氮(pentyleetrazole，PTZ)点燃大鼠海马神经元的Bcl-2和Bax的影响，借以了解其对神经元细胞凋亡的保护作用，弄清它在治疗癫痫中的进一步作用机制。1材料与方法1.1材料戊四氮及多聚甲醛均为Sigma公司产品，兔抗Bcl-2和Bax抗体购自北京中山试剂有限公司，T的制备MT临用前用无水乙醇溶解，再加生理盐水配制，使乙醇的浓度为5%。1.3动物饲养与分组提前1g/kg)诱导癫痫发作，并观察行为学变化。MT组按体重10mg/kg于注射PTZ之前20min、注射后立即、后1h、后2h分别经腹腔注射MT并观察1h，P

7、TZ组于相同时间注射等量含5%乙醇生理盐水。然后，3组全部行心脏灌注固定取材。1.4灌注与取材动物先用10%的水合氯醛(0.3g/kg)腹腔注射麻醉，麻醉显效后开胸在直视下将穿刺针自左心室插入主动脉，自右心房剪口放血，先快速注入约150ml生理盐水，然后滴注4%的多聚甲醛500ml，先快后慢，持续约1h，然后断头取脑，取出脑组织后修块(含海马)，将组织块放入4%多聚甲醛中，2～4h后取出，放入20%的蔗糖中过夜，常规脱水、透明、浸蜡、包埋、切片，片厚4μm。1.5免疫组织化学方法(S-P法)每只动物取8张脑片，4张用于Bax，4张用于Bcl-2。具体

8、步骤如下：(1)切片常规脱腊入水，PBS(pH7.4)洗3次，每次3min。(2)高压修复抗原，将切片浸入0