平痫冲剂对ｐｔｚ致痫大鼠中枢神经系统 ｎｍｄａｒ

《平痫冲剂对ｐｔｚ致痫大鼠中枢神经系统 ｎｍｄａｒ》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、平痫冲剂对ＰＴＺ致痫大鼠中枢神经系统ＮＭＤＡＲ【摘要】目的：探讨平痫冲剂抗癫痫的机制。方法：腹腔注射戊四唑制成慢性癫痫模型，通过免疫组织化学方法和显微图像分析技术检测大鼠颞叶及海马齿状回的谷氨酸受体（ＮＭＤＡＲ１）和γ－氨基丁酸受体（ＧＡＢＡＡＲα１）免疫反应的阳性细胞数（ｎ）、阳性细胞面积比（Ａａ％）及阳性细胞积分吸光度（ＩＡ）。结果：（１）与正常对照组比较，模型组颞叶及齿状回ＮＭＤＡＲ１的阳性细胞数、阳性细胞面积比上升，阳性细胞积分吸光度增加（Ｐ＜０．０１）；而西药治疗组及中药小、中、大剂量组与模型组比较，颞叶及齿状回

2、的ＮＭＤＡＲ１阳性细胞数、阳性细胞面积比都有不同程度地下降，阳性细胞积分吸光度也有不同程度地减少（Ｐ＜０．０１）。（２）与正常对照组比较，模型组颞叶及齿状回ＧＡＢＡＡＲα１阳性细胞数、阳性细胞面积比下降，阳性细胞积分吸光度降低（Ｐ＜０．０１）；而西药治疗组和中药小、中、大剂量组与模型组比较，颞叶及齿状回的ＧＡＢＡＡＲα１阳性细胞数、阳性细胞面积比都有不同程度地增加，阳性细胞积分吸光度也有不同程度地升高（Ｐ＜０．０１）。结论：平痫冲剂抗癫痫的作用机制可能是通过抑制颞叶及齿状回兴奋性神经递质受体ＮＭＤＡＲ１的活性与表达，并激活

3、其抑制性神经递质受体ＧＡＢＡＡＲα１的活性与表达，从而降低大脑皮质的兴奋性，有效抑制癫痫的形成及发展。【关键词】癫痫平痫冲剂ＰＴＺ点燃型癫痫大鼠模型ＮＭＤＡＲ１ＧＡＢＡＡＲα１癫痫是一种常见的慢性脑部疾病，全世界约有４千万人受累。我国癫痫的患病率约为３．３‰～５．８‰，其中儿童癫痫的发病率约为成人的１０倍，且半数以上在１０岁以内起病［１］。该病严重影响患者的生活、工作、学习，且可能在发作时遭遇危险而危及生命，还会伴有一系列复杂的社会心理问题，给患者、家庭及社会带来很大负担［２］。因此如何正确、有效地防治癫痫已成为医学界尤其

4、是儿科界广泛关注的问题。平痫冲剂为恩师张士卿教授依据中医理论，凭借多年临床经验总结所得，并经长期的临床运用，证明确有疗效。本实验通过检测大鼠颞叶氨基酸类神经递质受体的含量，来探讨平痫冲剂对癫痫的治疗效果及作用机理，为临床治疗提供更科学、更确切的理论依据。１实验材料戊四唑（ＰＴＺ），用前以生理盐水配制成质量浓度为２．５ｍｇ／ｍＬ的溶液；平痫冲剂（胆南星、僵蚕、天麻、代赭石、石菖蒲、丹参、白芍等），用时煎煮浓缩；苯巴比妥，质量浓度为１．０３ｍｇ／ｍＬ。２实验方法２．１动物分组将６０只２８ｄ龄的Ｗｉｓｔａｒ大鼠，质量（７０±１０

5、）ｇ，雌雄各半（甘肃省实验动物研究中心提供，医动字第１４－００７号），适应性饲养４ｄ后，随机分为６组，分别为：正常对照组、模型组、西药治疗组、中药小剂量组、中药中剂量组、中药大剂量组。２．２模型制备除正常对照组外，其余５组均造模，方法参考徐国龙等［３］癫痫模型的制备，即用ＰＴＺ亚惊厥剂量３２ｍｇ／ｋｇ，用前以生理盐水配制成质量浓度为２．５ｍｇ／ｍＬ的溶液，腹腔注射，每日１次，持续４周后停药１周，再用相同剂量的ＰＴＺ测试。凡显示连续５次Ⅱ级以上惊厥的，则视为达到点燃标准，Ⅳ~Ⅵ级的痫性行为被视为充分点燃。大鼠惊厥发作采用７点

6、评分法［３］。０级：没有行为上的发作；Ⅰ级：节律性点头或头部颤搐；Ⅱ级：阵挛性咀嚼；Ⅲ级：头部颤搐加前肢阵挛性抽搐；Ⅳ级：袋鼠姿势（上身直立）；Ⅴ级：跌倒；Ⅵ级：全身强直阵挛性惊厥。另外，正常对照组给予相同剂量的生理盐水。２．３给药方法造模成功１ｄ后，除正常对照组和模型组外，其余各组开始灌服药物。平痫冲剂用时煎煮浓缩，灌胃剂量按人与大鼠体表面积比［４］，折算成大鼠等效剂量，每日按４ｍＬ灌服平痫冲剂水溶液，质量浓度分别为低剂量组１．４ｇ／ｍＬ、中剂量组３．３ｇ／ｍＬ、高剂量组６．７ｇ／ｍＬ，西药治疗组每日按４ｍＬ灌服质量浓度

7、为１．０３ｍｇ／ｍＬ的苯巴比妥，正常对照组和模型组灌服等体积的生理盐水。每日灌胃１次，连续灌胃３周。２．４灌注与取材６组大鼠在相同条件下用乙醚吸入麻醉，四肢固定在手术板上，开胸，暴露心脏，直视下将穿刺针经左心室刺入，并以止血钳固定，然后剪开右心耳，随即用４℃预冷的生理盐水２５０ｍＬ快速灌注，再灌注含４０ｇ／Ｌ多聚甲醛的０．１ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲液５００ｍＬ。先灌注再改为滴注，调节滴速，先快后慢，共滴注１ｈ。观察大鼠全身僵硬后，迅速开颅取出完整大脑，去除脑干及小脑部分，将修整后的脑组织块置于上述滴注液内，４℃过夜，再置于２０

8、０ｇ／Ｌ蔗糖中１２ｈ。然后每个大脑半球于背侧海马最大断面处切取３ｍｍ厚的组织，要求该组织必须含有大鼠颞叶组织。随后制成石蜡包块，再做冠状切片，厚度为４μｍ。２．５免疫组化染色（ＳＡＢＣ法）石蜡切片常规脱蜡，室温下放入Ｈ２Ｏ２稀释液中１０ｍｉｎ后，滴加复合消化液８ｍｉｎ，再滴加５％ＢＳＡ封闭液２０ｍｉｎ，