调督安神胶囊对ptx致痫大鼠海马神经元nmdar1的影响

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1、调督安神胶囊对PTX致痫大鼠海马神经元NMDAR1的影响【关键词】癫痫调督安神胶囊N甲基D天冬氨酸受体亚单位NR1(NMDAR1)【Abstract】ObjectiveToobservetheeffectsofTiaoduAnshencapsuleontheNMDAR1inhippocampusneuroninpicrotoxin(PTX)-inducedepilepsyrats.MethodsThePTXinducedepilepsyratslydividedinto4groups：modelcontrolgroup,Chi

2、nesemedicineloedicinegroup.Theratsinistration:Doubledistillededicine.TheexpressionsofNMDAR1inhippocampusneuronmunohistochemistryandthepositiveneuronsedicinelopusneuron,echanismsinTiaoduAnshencapsuleimprovementonlearningandmemoryforepilepsyrats.【Keyg、250mg二种高、低浓度的悬浊液，存4

3、℃冰箱备用，灌胃时温服。丙戊酸钠：湖南湘中制药有限公司生产，批号：20041206，规格：200mg/片。脑复康：天津金世制药有限公司生产，批号：2000409，规格：400mg/片。加蒸馏水配置成每毫升含丙戊酸钠20mg、脑复康40mg的悬浊液，存4℃冰箱备用，灌胃时温服。印防己毒(picrotoxin，PTX)：购自Sigma公司，规格：1g/瓶。PTX溶于生理盐水，配置成0.01%溶液，存4℃冰箱备用，按1.5mg/kg/d腹腔注射。兔抗大鼠NMDAR1抗体购自精美生物工程有限公司，存-20℃冰箱备用。2实验方法2.1动物分组

4、40只SD大鼠，随机分为Ａ组(正常对照组)8只，PTX点燃组32只，造模成功后点燃组再随机分为4组，每组8只，分别为：Ｂ组(模型对照组)，C组(中药低剂量组)，D组(中药高剂量组)，E组(西药组)。2.2造模方法采用PTX腹腔注射点燃癫痫模型方法。按照Shandra［2］、田发发［3］等的实验方法进行，PTX点燃组每天上午9∶00～10∶30腹腔注射PTX，每次注射前为SD大鼠称重，以便PTX量与大鼠体重增加相适应。连续注射20～30d；A组腹腔注射等量的生理盐水，每天逐个动物观察、记录。点燃行为依据Racine［4］分级标准，凡已

5、获得连续5次２级或２级以上完全发，被认为完全点燃，符合点燃标准的点燃组大鼠继续予以原剂量注射，实际取材持续30d。2.3用药方法各组于点燃后开始连续灌胃，1次/d，共持续60d。剂量：A、B组灌服生理盐水2ml/(100g·d)；C、D组分别灌服低、高浓度调督安神胶囊悬浊液2ml/(100g·d)；E组灌服含丙戊酸钠和脑复康的悬浊液，2ml/(100g·d)。期间大鼠自由摄食与饮水。2.6免疫组织化学染色一抗为兔抗大鼠NMDAR1抗体，4℃孵育36h；生物素化二抗，室温孵育3h；SABC复合物(1︰200，含0.5%Triton)室

6、温孵育2h；0.05％DAB和0.03％H2O2混合液显色5～10min；裱片于挂有1%明胶的载玻片上，烘干，脱水，封片。阴性对照用PBS代替一抗，同步进行免疫组织化学染色，步骤相同。3检测指标光镜下(20×10)对各组切片的免疫阳性细胞数进行记数。选择海马同一阶段的CA3区进行记数，每一张脑片随机选取5个视野，测量统一视野内阳性细胞数，取其算术平均值进行统计学分析。实验数据以±s表示，使用statistic(5.0)统计软件对数据进行分析，采用单因素方差分析。4结果NMDAR1免疫阳性神经元主要分布在皮层和海马CA1、CA2、CA

7、3区和齿状回。光镜下可见海马免疫阳性细胞被染成棕黄色，NMDAR1主要表达于胞膜、胞浆。与正常对照组比较，模型对照组的海马CA3区NMDAR1免疫阳性细胞数明显增高，有统计学意义上的差异(P<0.05)。与模型对照组比较，中药低剂量组、中药高剂量组、西药组海马CA3区NMDAR1免疫阳性细胞数均有不同程度的下降，其中中药高剂量组的下降最为显著，与模型对照组比较有统计学意义上的差异(P＜0.05)，与A组比较差异没有统计学意义(P＞0.05)。说明高剂量的调督安神胶囊能够明显抑制NMDAR1的高水平表达，并使其表达水平接近于正常

8、。结果见表1，图1(见封2)。表1五组大鼠海马CA3区NMDAR1阳性细胞数比较(略)注：与A组比较，*P<0.05，与B组比较，ΔP<0.055结论谷氨酸(Lglutamicacid，GLU)是中枢神经系统中重要的兴奋