资源描述：
《芍药甙对大鼠海马神经元的保护作用论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、芍药甙对大鼠海马神经元的保护作用论文【关键词】芍药甙；缺氧；海马神经元；抗氧化剂Neuroprotectiveeffectofpaeoniflorinonanoxicallyculturedrathippocampalneurons【Abstract】AIM:Toinvestigatepalneurons.METHODS:Hippocampalneuronslyinto4groupsaccordingtodifferentculturemediumsaddedol/Lnimodipine,40or80μmol/Lpaeoniflorin,ornoanymedicine(asc
2、ontrolgroup).AcuteanoxiamodelL/LNO2+50mL/LCO2mixturegases.Theviablecellsethod.Theapoptosisrateanddeathrateofhippocampalneuronsetry(FCM).ThecontentsofMDAandNOandtheactivitiesofSODinthesupernatantsofcellcultureinedbybiochemicalmethods.RESULTS:Inparisonpalneurons,palneuronsagainstanoxicinjury.
3、Themechanismunderlyingthiseffectofpaeoniflorinmaybemediatedbyeliminatingthefreeradicals,byincreasingtheactivitiesofantioxidativeenzymestoinhibittheoxidativedamagescausedbyanoxia.【Keypalneurons;antioxidants【摘要】目的：观察缺氧对大鼠海马神经元的影响及芍药甙的保护作用.方法：采用细胞培养方法获取10~14d的海马神经元,将药物加入到培养液中，4h后建立950mL/LNO2+5
4、0mL/LCO2混合气体急性缺氧模型,台盼蓝染色细胞计数并做流式细胞仪检测,以及酶法测定抗氧化酶（超氧化物岐化酶SOD）的抗氧化能力及丙二醛（MDA）.freela公司).CO2细胞培养箱(上海福玛实验设备有限公司),垂直单向流型YJ超净工作台（苏州市洁净技术研究所）.1.2方法1.2.1海马神经元的培养和分组按已有的细胞培养方法［3］,取大鼠消毒,断头,分离出双侧海马,剪碎成1cm3的组织块,加入1.25g/L胰酶消化30min,用含有100mL/L胎牛血清及100mL/L马血清的种植培养液终止胰酶的作用.制成细胞悬液（1×109/L）接种到6孔板中(2mL/孔),置于37
5、℃50mL/LCO2培养箱中培养24h,更换维持培养液（50mL/L胎牛血清,100mL/L马血清）,以后每3d半量换液1次,第4~5日加入阿糖胞苷,终浓度为5mg/L(25μL/皿).接种10~14d的海马神经元随机分为4组,即对照组,尼莫地平5μmoL/L组,芍药甙40μmoL/L组,芍药甙80μmoL/L组.每组4个6孔板：将所用药物加入到细胞培养液中进行孵育.1.2.2尼氏染色鉴定神经元将培养的海马神经元经0.02mol/LPBS(pH7.4)漂洗1~2次,40g/L多聚甲醛溶液固定1h,PBS漂洗后,10g/L甲苯胺蓝染液染色20min,950mL/L乙醇分色,37
6、℃干燥,二甲苯透明,中性树脂封片.1.2.3缺氧模型的制备［4］4h后将已分组给药的培养板移入37℃恒温密闭容器中,连续充以950mL/LNO2+50mL/LCO2混合气体,流速为20mL/min,持续1h.1.2.4海马神经元细胞凋亡率的检测将上述处理过的细胞制成单细胞悬液,1000r/min离心10min,去上清,PBS冲洗,700mL/L乙醇固定,400目的筛网过滤,加PI染液,上流式细胞仪检测.1.2.5海马神经元上清液中SOD,MDA和NO的测定按试剂盒说明书的要求先求出样本的最佳加样量,海马神经元经上述同样处理后,取细胞上清液,按试剂盒说明书的要求操作,测定各样本
7、的吸光度,并依下列公式计算出SOD,MDA和NO的含量.SOD活力(U/mL)=(对照管吸光度-测定管吸光度)/对照管吸光度/50%×反映体系的稀释倍数×样本测试前的稀释倍数MDA含量(μmol/L)=(测定管吸光度-测定空白管吸光度)/(标准管吸光度-标准空白管吸光度)×标准品浓度(10μmol/L)×样本测试前稀释倍数NO含量(μmol/L)=(测定管吸光度-空白管吸光度)/(标准管吸光度-空白管吸光度)×标准品浓度(100μmol/L)×样品测试前稀释倍数统计学处理：实验数据用x±s表示,用简明统
