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1、芍药甙对大鼠海马神经元的保护作用【关键词】芍药甙；缺氧；海马神经元；抗氧化剂 Neuroprotectiveeffectofpaeoniflorinonanoxicallyculturedrathippocampalneurons 【Abstract】AIM:Toinvestigatepalneurons.METHODS:Hippocampalneuronslyinto4groupsaccordingtodifferentculturemediumsaddedol/Lnimodipine,40or80μmol/Lpaeoniflori
2、n,ornoanymedicine(ascontrolgroup).AcuteanoxiamodelL/LNO2+50mL/LCO2mixturegases.Theviablecellsethod.Theapoptosisrateanddeathrateofhippocampalneuronsetry(FCM).ThecontentsofMDAandNOandtheactivitiesofSODinthesupernatantsofcellcultureinedbybiochemicalmethods.RESULTS:Inparisonp
3、alneurons,palneuronsagainstanoxicinjury.Themechanismunderlyingthiseffectofpaeoniflorinmaybemediatedbyeliminatingthefreeradicals,byincreasingtheactivitiesofantioxidativeenzymestoinhibittheoxidativedamagescausedbyanoxia. 【Keypalneurons;antioxidants 【摘要】目的：观察缺氧对大鼠海马神经元的影响及
4、芍药甙的保护作用.方法：采用细胞培养方法获取10~14d的海马神经元,将药物加入到培养液中，4h后建立950mL/LNO2+50mL/LCO2混合气体急性缺氧模型,台盼蓝染色细胞计数并做流式细胞仪检测,以及酶法测定抗氧化酶（超氧化物岐化酶SOD）的抗氧化能力及丙二醛（MDA），NO的含量.结果：离体条件下芍药甙组较对照组SOD活性升高,MDA及NO含量降低（P<0.01），且成量效比例关系,同时细胞凋亡率显著降低.结论：芍药甙在体外有抗缺氧损伤的作用,其作用机制可能是通过抑制细胞凋亡,提高抗氧化酶的活力,清除自由基而发挥作用. 【
5、关键词】芍药甙；缺氧；海马神经元；抗氧化剂 0引言 脑缺血时机体产生大量的氧自由基,且NO在体内局部浓度升高,与周围的氧自由基等反应而生成活性氮氧化合物,是一种强氧化剂,也可启动脂质过氧化.自由基医学的研究表明,神经元的损伤、凋亡、坏死等与脂质过氧化密切相关,而抗氧化剂可通过清除自由基,提高抗氧化酶等途径有效地阻断或防止这一过程［1］.芍药甙是芍药的主要成分之一,能够抑制花生四烯酸的代谢,具有抗血栓的作用,以及抗氧化和抗惊厥作用［2］.但对其在神经细胞中的作用及机制研究甚少.本试验通过体外培养海马神经元,建立急性气体缺氧模型,用台盼蓝
6、染色细胞计数,流式细胞仪检测以及酶法测定抗氧化酶（超氧化物岐化酶）的抗氧化能力及丙二醛(MAD),一氧化氮(NO)的含量,探讨芍药甙是否有抗缺氧损伤的作用,以寻求预防和治疗脑缺血的药物. 1材料和方法 1.1材料新生1~3dEM,马血清(Gibco公司);胎牛血清(杭州四季青生物材料工程公司);超氧化物歧化酶(SOD),MAD,NO(南京建成生物工程研究所);多聚赖氨酸(Sigma公司).CO2细胞培养箱(上海福玛实验设备有限公司),垂直单向流型YJ超净工作台（苏州市洁净技术研究所）. 1.2方法 1.2.1海马神经元的培养和分组
7、按已有的细胞培养方法［3］,取大鼠消毒,断头,分离出双侧海马,剪碎成1cm3的组织块,加入1.25g/L胰酶消化30min,用含有100mL/L胎牛血清及100mL/L马血清的种植培养液终止胰酶的作用.制成细胞悬液（1×109/L）接种到6孔板中(2mL/孔),置于37℃50mL/LCO2培养箱中培养24h,更换维持培养液（50mL/L胎牛血清,100mL/L马血清）,以后每3d半量换液1次,第4~5日加入阿糖胞苷,终浓度为5mg/L(25μL/皿).接种10~14d的海马神经元随机分为4组,即对照组,尼莫地平5μmoL/L组,芍药甙40
8、μmoL/L组,芍药甙80μmoL/L组.每组4个6孔板：将所用药物加入到细胞培养液中进行孵育. 1.2.2尼氏染色鉴定神经元将培养的海马神经元经0.02mol/LPBS(pH7.4)漂洗1
