纳洛酮对海马神经元的预防保护作用

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1、纳洛酮对海马神经元的预防保护作用　　【摘要】目的为观察缺氧对大鼠海马神经元的影响及纳络酮的保护作用。方法采用细胞培养方法获取10～14d的海马神经元，将含药血清加入到培养液中，4h后建立95%N2+5%CO2混合气体急性缺氧模型，胎盘兰染色细胞计数并做流式细胞仪检测以及酶法测定抗氧化酶（超氧化物歧化酶）的抗氧化能力及丙二醛、NO的含量。结果离体条件下纳络酮可显著增强海马神经元的活性，降低其凋亡率及死亡率；提高细胞上清夜中超氧化物歧化酶的活性，降低丙二醛及NO的含量，且成量效比例关系。结论纳络酮在体外有抗缺氧损伤的作用。其作用机制可能是通过抑制细胞凋亡，提高抗氧化酶的活力，清除自由

2、基，而发挥作用。.L.编辑。　　【关键词】纳络酮；缺氧；海马神经元；抗氧化剂　　　　【Abstract】ObjectiveInordertoinvestigateandconfirmpalneuronalcells.MothodsThepresentstudyusedmorphologicalchangesandtheactivitiesofSODandrhecontentsofMDAandNOasindicators.Themorphologicalchangesethod，Theapoptosisrateanddeathrateofhippocampalneuronaletry

3、（FCM）.ThecontentsofMDAandNOandtheactivitiesofSODinthesupernatantsofcellsinedbybiochemicalmethods.ResultsTheresultsdemonstratedthat：invitro，paringpalneuronalcells，decreasedtheapoptosisrateandthedeathrate，increasedtheactivitiesofSODanddecreasedthecontentsofMDAandNOinthesupernatantsofcells.Conclu

4、sionTheaboveresultssuggestthat：theNalaxonehastheneuroprotectiveeffectonhippocampalneuronalcellsagainstanoxic.ThemechanismofthiseffectsofNalaxonemaybemediatedbyeliminatingthefreeradicals，byincreasingtheactivitiesofantioxidativeenzymestoinhibittheoxidativedamagescausedbyanoxic.　　【Keypalneuronalc

5、ells；Antioxidants　　　　脑缺血时机体产生大量的氧自由基，且NO在体内局部浓度升高，与周围的氧自由基等反应而生成活性氮氧化合物，是一种强氧化剂，也可启动脂质过氧化。自由基医学的研究表明，神经元的损伤、凋亡、坏死等与脂质过氧化密切相关，而抗氧化剂可通过清除自由基，提高抗氧化酶等途径有效的阻断或防止这一过程［1］。近年发现纳络酮还具有非拮抗阿片受体作用，对稳定脑出血后神经元有一定的作用，但目前还缺乏对海马神经元培养的相关实验支持［2］。本试验体外培养海马神经元，建立急性气体缺氧模型，胎盘兰染色细胞计数并做流式细胞仪检测以及酶法测定抗氧化酶（超氧化物歧化酶）的抗氧化能力及

6、丙二醛、NO的含量。以此来探讨纳络酮在体外是否有抗缺氧损伤的作用，其作用机制是否是通过抑制细胞凋亡，提高抗氧化酶的活力，清除自由基，而发挥作用的。从而来确定纳络酮在脑缺血中的神经元保护作用，并寻求预防和治疗脑缺血发生的药物。　　　　1材料与方法　　　　1.1材料　　1.1.1实验动物为新生的EM、马血清（Gibco公司），胎牛血清（杭州西季青生物材料工程公司），超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MAD）、一氧化氮（NO）（南京建成生物工程研究所），多聚赖氨酸（Sigma公司）。　　1.1.3主要仪器设备OLYMPUS，BX50，PM-20系统显微镜（日本），PM-6，OLYMPUS

7、解剖显微镜（日本），二氧化碳细胞培养箱（上海福玛实验设备有限公司），YJ超净工作台（垂直单向流型）（苏州市洁净技术研究所）。　　1.2方法　　1.2.1海马神经元的培养　　按已有的细胞培养方法［3］，取新生1~3d的×1cm×1cm的组织块，加入1.25g/L胰酶消化30min（中间轻轻振荡几次），用含有10%胎牛血清及10%马血清的种植培养液终止胰酶的作用。制成细胞悬液（1.0×106/ml）接种到六孔板中（2ml/孔），37℃5%CO2培养箱中培养24h后更换维持