凝血酶预处理对海马神经元的保护作用

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1、国土资源管理年度工作总结今年以来，在市局的正确领导下，我局童萼塘［摘要］目的：研究凝血酶预处理对大剂量凝血酶诱导海马神经元凋亡的影响，阐明TPC的保护作用。方法:海马神经元分别经生理盐水、小剂量TM及凝血酶受体激活肽预处理48h后再加大剂量TM作用24hoTUNEL法及流式细胞术检测凋亡细胞数和凋亡百分率，应用免疫细胞化学方法检测神经元Be1-2及Bax蛋白表达。结果：与Sham组比较，TPC组TUNEL阳性细胞数和凋亡百分率明显降低，Be1-2表迗上调，Bax表迗明显下调。与Sham组比较，TR

2、AP预处理组TUNEL阳性细胞数和凋亡百分率明显降低，Bel-2表迗上调，Bax表迗明显下调。TRAP预处理组与TPC组相比差异无显著性。结论:TPC可抑制TM导致的神经细胞凋亡，激活PAR-1，促进Bel-2的表达和降低Bax的表迗，可能是TPC抑制细胞凋亡的机制之一。［关键词］凝血酶预处理；细胞凋亡；Bel-2；Bax；蛋白酶激活受体-1TheEffectofThrombinPreconditioniToinvestigatetheeconditioningontheapalneuronsan

3、dexplongontheApoptosisofHippocampalNeuronsAbstract：Objectiveffectofthrombinprepoptosisofhippocamrethepotentialmechanisms.MethodsHippocampalneuronswerepretreatedwithsaline,lU/mlTMand5Umo1/Lthrombinreceptoractivatingpeptidesfor48hbeforeexposrofapoptotic

4、cellsaeuronsweremeasured1eotidyltransferas-biotinnickend-labandBaxprotEinexpreyimmuocytochemicaliccellsandapoptotidecreasedsignificapressionwasincreasssionwasdecreasedsoShamgroup,thenumbandapoptoticrateofedsignificantlyinTonwasincreased,Baxasdecreased

5、signifiignificantdifferenCTPCcouldinhibitneedbymechanismofneuedto40U/mlTM,numbendapoptoticrateofnbyterminaldeoxynuce(TdT)mediateddUTPelingmethodandFlowssionweremeasuredbThenumberofapoptotcrateofneuronswerentlyinTPCproteinexed,Baxproteinexpreignifleant

6、lyinTPCterofapoptoticcellsneuronsweredecreasRAPproteinexpressiproteinexpressionwcantlyinTRAPwasnosceinTRAPgroupandTPuronapoptosisinducroprotectiveeffectofTPCmaybethroughactivatingPAR-1，叩-regulatingBcl-2proteinexpressionanddown-regu1atingBaxexpression.

7、Keywords：Thrombinpreconditioning；Apoptosis；Bel-2;Bax;Proteaseactivatedreceptor-1作为血肿成分中最特殊的物质，凝血酶在脑出血脑损伤中的作用倍受关注［1］。研究发现，虽然大剂量凝血酶可导致脑损伤和细胞凋亡，但低浓度的凝血酶却具有神经保护作用。经过小剂量凝血酶预处理后，凝血酶和脑内血肿所致的脑水肿可减轻，大鼠大脑中动脉梗塞模型中的梗塞面积明显减小［2,3］，这种现象被称为凝血酶预处理或凝血酶诱导的脑耐受。为了探讨凝血酶预处理

8、的神经保护机理，本实验采用小剂量凝血酶预处理原代培养的海马神经元，结合TUNEL法、流式细胞术及免疫细胞化学等方法，研究凝血酶预处理的保护作用及其机制。1材料和方法材料新生SD大鼠80只（华中科技大学同济医学院实验动物中心提供），凝血酶，礙血酶受体激活肽，DMEM培养基，B27促生长剂，神经元特异性烯醇化酶，Bcl-2、Bax小鼠单克隆抗体，TUNEL试剂盒，SP免疫组织化学试剂盒。方法新生大鼠海马神经元原代培养:取Id新生SD大鼠速冻3~5min，消毒后于超净工作台内，开颅取全脑