结核分枝杆菌临床分离株基因分型与耐药性的检测

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1、结核分枝杆菌临床分离株基因分型与耐药性的检测Mycobacteriumtuberculosisclinicalisolatesgenotypinganddrugresistancedetection作者姓名：韦珍专业名称：病原生物学指导教师：赵春燕教授学位类别：医学硕士答辩日期：2015年5月22日摘要结核分枝杆菌临床分离株基因分型与耐药性的检测目的了解22株结核分枝杆菌临床分离株的基因型分布情况，探索适合结核分枝杆菌北京基因型鉴定的方法。探讨结核分枝杆菌北京基因型菌株与耐药是否相关。分析结核分枝杆菌耐药性与耐药基因之间的联系。方法对收集的

2、吉林省22株结核分枝杆菌临床分离株进行RD105缺失基因检测法基因分型研究。应用绝对浓度法药物敏感试验方法检测22株结核分枝杆菌对异烟肼、利福平、链霉素、卡那霉素、氧氟沙星及对氨基水杨酸六种抗结核药物的耐药性，最后对药敏结果和基因分型结果进行分析。对于耐药菌株将其katG基因、rpoB基因、rpsl基因、rrs基因、gyrA基因及thyA基因进行测序，检测其耐药基因是否存在突变并且确定突变的类型。结果22株结核分枝杆菌临床分离株中有10株耐药菌株，占45.5%。对利福平耐药的有6株，占27.3%；对异烟肼耐药的有4株，占18.0%；对链霉素

3、耐药的有2株，占9%；对卡那霉素耐药的有4株，占18.0%；对氧氟沙星耐药的有3株，占13.6%，对对氨基水杨酸耐药的有一株，占4.5%，北京基因型菌株占77.3%(17/22)。17株北京家族结核分枝杆菌临床分离株中52.9%（9/17）表现对六种抗结核药物敏感，47.1%（8/17）表现为耐药；非北京家族菌株中60%（3/5）表现为敏感，40%（2/5）表现为耐药。经检验，北京家族菌株与非北京家族菌株耐药率差异无统计学意义。4株异烟肼耐药株中，有1株未发生katG基因突变，其它3株katG基因发生突变，均发生在315位点，由AGC（Se

4、r）突变成ACC（Thr）。6株利福平耐药株中，有4株rpoB基因发生531位点突变，由TCG（Ser）突变成TTG（Leu）。2株rpoB基因发生526位点突变，由CAC（His）突变成GAC（Asp）。2株链霉素耐药株rpsl基因均发生43位点突变，由AAG（Lys）突变成AGG（Arg）。4株卡那霉素耐药株中，有1株rrs基因未发生突变，其它3株rrs基因均发生11位点突变，由GGT（Gly）突变成GTT（Val）。3株氧氟沙星耐药株gyrA基因均发生94位点突变，GAC（Asp）突变成GCC（Gly）。1株对氨基水杨酸耐药I株thy

5、A基因在355位点C碱基缺失，由CTG（Leu）突变成GTC（Val）。结论RD105缺失基因检测法是鉴定MTB北京基因型的简便、有效的方法；北京基因型菌株为所研究的结核分枝杆菌株中的优势菌株；北京基因型菌株与非北京基因型菌株两者耐药率的差别无统计学意义。结核分枝杆菌对抗结核药物耐药与相关耐药基因突变密切相关。关键词：结核分枝杆菌，RD105基因缺失，北京基因型，耐药性，耐药基因IIAbstractMycobacteriumtuberculosisisolatesgenotypinganddrugresistancedetectionTof

6、indoutthedistributionof22clinicalisolatesofMycobacteriumtuberculosisgenotyping，explorethebestmethodstoidentificateMycobacteriumtuberculosisBeijinggenotype.Toanalyzethecorrelationbetweendifferentgenotypesanddrugresistance.DiscoverytherelationshipbetweenMTBdrugresistanceandr

7、esistance-relatedgenetoexploretherapidwaytodetectdrug-resistantMycobacteriumtuberculosis.Methods22clinicalisolatesofMycobacteriumtuberculosiswhichwerecollectedfromJilinProvincewereidentifiedwithRD105detectionmethod，useabsoluteconcentrationmethodtotestdrugsensitiveoftheseis

8、olatestosixkindofanti-TBdrugsincludingisoniazid,rifampin,streptomycin,kanamycin,ofloxacin