石家庄地区结核分枝杆菌临床分离株基因分型及耐药性分析-病原生物学专业毕业论文

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应法研究生签名导师签章名萎五拗二级学院领导盖毒乏I．-二蔓年囊月-’日河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究

2、成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：导师签章：名矾年月日万方数据目录中文摘要一1英文摘要一4英文缩写一7研究论文石家庄地区结核分枝杆菌临床分离株基因分型及耐药性分析前言翮舌一一9材料与方法一10结果一18附图一24附表一28讨论．．42结论一45参考文献一46综述结核分枝杆菌基因分型技术研究进展51致谢一56个人简历一57万方数据中文摘要石家庄地区结核分枝杆菌临床分离株基因分型及耐药性分析摘要目的：对石家庄地区结核分枝杆菌临床分离株进行基因分型研究和药物敏感性试验，分析了石家庄地区结核分枝杆菌基因多态性和分子流行病学特征，及石家庄地区结核

3、分枝杆菌临床分离株的耐荮隋况以及耐药菌株基因分型特征，有助于对石家庄地区结核病的流行发展趋势的充分了解，为结核病的有效防治提供科学依据。方法：收集2014年1月至2014年10月期间在石家庄市第五医院就诊的结核病患者经临床分离培养得到的结核分枝杆菌菌株及相应病例背景资料，采用PNB／TCH初步鉴别法和多位点PCR(Multi．10cusPCR)进行菌种鉴定。采用比例法进行一线抗结核药(链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇)的药物敏感性试验。应用间隔区寡核苷酸基因分型(Spoligotyping)和15位点数目可变串联重复序列分析(VNTR)进行菌株的基因分型。运用BioNumer

4、ics5．0软件进行聚类分析，运用SPSS16．0软件进行Hunter-Gaston分辨指数(HGDI)计算和卡方检验(计数资料)、t检验(计量资料)等数据分析。结果：1收集到石家庄地区结核分枝杆菌培养阳性共373株，经过PNB／TCH和多位点PCR实验证实为结核分枝杆菌有367株和非结核分枝杆菌6株。2间隔区寡核苷酸基因分型法(Spoligotyping)367株结核分枝杆菌呈现明显的基因多态性。通过比对SpolDB4．0数据库，可分为2个基因群，即北京家族(Beijingfamily)和非北京家族(Non—Beijingfamily)，分别占91．3％(335／367)和

5、5．7％(21／367)。有1l株(3．O％)的基因型不能被SpolDB4．0数据库所识别，可能为新的基因型。北京家族菌株中99．4％(333／335)为典型北京家族(TypicalBeijingfamily)，表现为仅与35-'-,43之间的9个间隔区呈现阳性杂交反应；其余菌株在35,-一43之间有l～4个位点呈现阴性杂交反应，称为非典型北京家族(AtypicalBeijingfamily)或北京样基因型(Beijing．1ikefamily)。非北京家族菌株表现出高度的基因多态性，包括T基因型，占66．7％(14121)；MANU基万方数据中文摘要因型，占14．3％(3／

6、21)；LAM基因型，占14．3％(3／21)；H基因型，占4．7％(1／21)。经BioNumerics软件聚类分析，全部29种基因型包含10个簇和147种独特基因型(单一菌株类型)。其中最大的一个簇含331株(90．2％)，为北京家族基因型。Spoligotyping对所有菌株的HGDI值为0．2486。3数目可变串联重复序列分析(帅)经BioNumerics软件聚类分析，367株结核分枝杆菌可分为194种VNTR基因型，其中221(60．22％)株菌可被聚类为48个簇，146(39．78％)种基因型为独特基因型；335株北京家族菌株呈现161种VNTR基因型，其中219

7、(65．37％)株可聚为45个簇，116(34．63％)为独特基因型。VNTR对所有菌株的HGDI值为0．9838，VNTR和Spoligotyping联合使用时，I-IDGI值为0．9853。4石家庄地区2014年结核分枝杆菌的总耐药率为31．61％(116／367)，其中初始耐药率为24．47％(69／282)，获得性耐药率为55．29％(47／85)。获得性耐药率明显高于初始耐药率，差异有统计学意义(Z2=28．71，P<0．05)。耐药株中，单耐药36株，占9．80％；耐多药或耐两种以上药物的多