羊栖菜多糖SFPS激活JNK_NRF2_ARE信号通路并发挥抗氧化和抗衰老作用

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1、分类号：O6UDC：540学号：15451382278密级：公开温州大学硕士学位论文题目：羊栖菜多糖SFPS激活JNK/NRF2/ARE信号通路并发挥抗氧化和抗衰老作用作者姓名：赵子慧培养类型：非定向专业名称：化学生物学研究方向：活性大分子化学生物学指导教师：陈培超副教授完成日期：2018年5月温州大学学位委员会分类号：O6UDC：540学号：15451382278密级：公开温州大学硕士学位论文题目：羊栖菜多糖SFPS激活JNK/NRF2/ARE信号通路并发挥抗氧化和抗衰老作用作者姓名：培养类型：非定向专业名称：化学生物学研究方

2、向：活性大分子化学生物学指导教师：完成日期：2018年5月温州大学学位委员会温州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得温州大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。论文作者签名：日期：年月日温州大学学位论文使用授权声明本人完全了解温州大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：

3、学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权温州大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本人在导师指导下完成的论文成果，知识产权归属温州大学。保密论文在解密后遵守此规定。论文作者签名：导师签名：日期：年月日日期：年月日羊栖菜多糖SFPS激活JNK/NRF2/ARE信号通路并发挥抗氧化和抗衰老作用摘要大型褐藻羊栖菜(Sargassumfusiforme)被称为“长寿菜”，其多糖成分具有抗氧化和抗衰老的活性，但羊

4、栖菜多糖发挥抗氧化、抗衰老的作用机制尚不明确。本实验室前期的研究发现，长期喂食羊栖菜多糖SFPS组分的雄性小鼠肝脏中JNK（c-JunN-terminalkinase）的表达水平显著上调。Jnk被认为是一种重要的长寿基因，推测羊栖菜多糖SFPS可能通过调控Jnk表达模式而发挥其抗氧化和抗衰老作用。在果蝇和线虫中，提高JNK的表达水平可以有效地增强机体的抗氧化能力，进而延长个体寿命。然而，高等哺乳动物中，Jnk衍生出了3种主要的同源物Jnk1，Jnk2和Jnk3（Jnk3主要表达于心、睾丸和大脑，而Jnk1、Jnk2在机体中广泛表

5、达），它们与衰老的具体联系仍不清楚。因此，本课题首先利用实时荧光定量PCR（qPCR）和WesternBlot技术检测不同月龄（3月龄、9月龄、11月龄和20月龄）雄性小鼠肝脏中JNK1/2的表达模式与衰老的联系。实验结果表明，随着小鼠月龄的增加，Jnk1、Jnk2的mRNA和蛋白表达水平都显著下降，即在雄性小鼠中JNK1/2与衰老呈负相关。同时，实验结果发现，随着衰老的进程的发展，分子量为54kDa的JNK1/2的变化量I最大。随后利用RT-PCR的方法特异地区分了Jnk的各个isoform，并检测了各个isoform在正常小

6、鼠衰老过程中的表达模式。实验结果表明，随着小鼠月龄的增加，Jnk1-β2、Jnk2-α1和Jnk2-β2的mRNA表达水平显著性下调（其中Jnk2-α1翻译为46kDa蛋白，Jnk1-β2和Jnk2-β2翻译为54kDa蛋白）。因此，我们的研究结果提示，Jnk1-β2、Jnk2-α1和Jnk2-β2在衰老过程中发挥重要作用。实验通过检测喂食羊栖菜多糖的小鼠中Jnk的表达，研究羊栖菜多糖SFPS组分影响Jnk的表达模式。实验结果显示，长期喂食羊栖菜多糖SFPS组分的老年小鼠（20月龄）的肝脏中，分子量为46kDa和54kDa的JN

7、K1/2蛋白表达量都显著上调，其中JNK54kDa上调远高于JNK46kDa，并且Jnk1-β2mRNA（Jnk1-β2翻译为54kDa的蛋白）的表达水平变化最为显著。因此，推测长期喂食SFPS与Jnk1-β2的表达水平密切相关。随后对蛋白结构预测和生物信息学技术分析发现JNK蛋白三级结构相似，各个isoform在IX和X子区域（subdomain）的序列差异及C端末尾（C-terminaltail）特异剪切是JNK可以特异表达多个不同的JNK46kDa和54kDa蛋白的原因。活性区域activeloop位于体现各个isofor

8、m差异的subdomain，是识别底物的重要位点。Activeloop序列的差异性及C-terminaltail对于JNK与底物的特异性反应发挥了重要作用。抗氧化调控因子NRF2上有多个位点与JNK底物的保守位点相同，提示NRF2可能是JNK的底物，并被JNK磷