高糖对层粘连蛋白α1的表达及细胞生物学行为影响

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1、分类号：R77单位代码：10343学号：151002490硕士学位论文论文题目:高糖对层粘连蛋白α1的表达及细胞生物学行为影响研究生姓名：宋广伟学科专业：眼科学类型：专业型指导教师：郑海华副教授二O一八年五月论文题目:高糖对层粘连蛋白α1的表达及细胞生物学行为影响答辩委员会主席：杜持新教授浙江大学医学院附属第一医院答辩委员会成员：郑穗联副教授温州医科大学附属第二医院蔡剑秋副教授温州医科大学附属第二医院论文答辩日期：2018年5月24日目录中文摘要………………………………………………………………1英文摘要………………………………………………………………3前言…

2、……………………………………………………………5材料与方法……………………………………………………………6结果………………………………………………………………11讨论………………………………………………………………25小结………………………………………………………………26参考文献………………………………………………………………27致谢………………………………………………………………29综述………………………………………………………………30参考文献………………………………………………………………34温州医科大学硕士学位论文缩略词表英文缩写英文中文DRDia

3、beticretinopathy糖尿病性视网膜病变ECMExcetralCellularMatrix细胞外基质LAMA1Lamininalpha1层粘连蛋白α1IFImmunofluorescence免疫荧光法WBWesternBlot蛋白免疫印迹法ANOVAAnalysisofVariance单因素方差分析VEGFVascularendothelialgrowthfactor血管内皮生长因子BMBasementmembrane基底膜FNFibronectin纤连蛋白LNLaminin层粘连蛋白PGProteoglycans蛋白聚糖HSPGsHeparans

4、ulfateproteoglycans硫酸乙酰肝素PKCproteinkinaseC蛋白激酶CAGEsadvancedglycationendproducts糖基化终末产物2温州医科大学硕士学位论文高糖对层粘连蛋白α1的表达及细胞生物学行为影响中文摘要目的糖尿病性视网膜病变是糖尿病患者非常常见的微血管并发症，高血糖可以引起细胞外基质组份的增加，层粘连蛋白作为重要的细胞外基质组份之一，还参与基底膜和血管的构成，并通过细胞膜上的受体影响细胞的生物学行为，如细胞的粘附、迁移、增殖等，而其中α链是层粘连蛋白的主要构成之一，我们想探究不同糖浓度培养液对层粘连蛋白α1（

5、Lamininalpha1LAMA1）的表达以及对细胞生长、粘附、迁移、增殖等常见生物学行为的影响，证明LAMA1是否在糖尿病性视网膜病病变的发生发展中起到一定作用。方法1、预先配置好4种不同糖浓度细胞培养液（5mM、15mM、25mM、35mM），其中5mM组作为对照组（正常糖浓度组），使用不同糖浓度培养液常规培育ARPE-19和RF/6A两种细胞，显微镜下观察相同位置、不同时间（0d、1d、2d、3d、4d）各组糖浓度下的细胞生长情况，并做拍照记录加以比较。2、利用WesternBlot、qRT-PCR、IF免疫荧光技术检测在不同糖浓度下和时间梯度下（处

6、理24h、48h后）的LAMA1的表达情况（包括蛋白水平、核酸水平、细胞水平）。3、通过细胞划痕实验、CCK-8实验、细胞粘附实验分别检测两种细胞的迁移能力、增殖能力、粘附能力的变化，从而反映高糖对细胞生物学行为产生的影响。结果本次研究我们发现，随着糖浓度增加，高糖组两种细胞的生长速度都较对照组（正常糖浓度5mM）加快，在处理相同时间情况下是糖浓度越高细胞生长越快。同样的，高糖组细胞的增殖、迁移、粘附能力都较正常组有不同程度提高：在细胞增殖能力方面，三个高糖组都较正常组提高，且之间差异具有统计学意义（P<0.05）；在细胞水平迁移方面，处理24h后，高糖组有

7、较正常组提高，但无统计学意义（P>0.05），随时间延长，25mM和35mM组较对照组之间有明显差异，且差异具有统计学意义；在细胞粘附水平上，高糖组稍有提高，但无明显统计学差异，仅在处理8h后个别高糖组较低糖组间差异有意义。但非常有趣的是，随着糖浓度增加，两种细胞LAMA1蛋白的表达是先轻微升高,然后开始出现明显下降趋势，在ARPE-19组尤甚，细胞免疫荧光上差异不是太明显，但蛋白和核酸水平变化是有差异的且有统计学意义（P<0.05）。结论高糖环境不同程度的增加了ARPE-19和RF/6A细胞的增殖、迁移、粘附能力，但降低LAMA1蛋白的表达。这些细胞生物学

8、行为的改变，为糖尿病性视网膜病变的发生发展提供了可能