辅助生殖技术子代印记基因peg10、l3mbtl1的表达和甲基化状态研究

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterExpressionandmethylationstatusofimprintedgenesPEGIO，、L3MBTL1inthechildrendeviredfromAssistedReproductiveTechnologyByLifangYUESupervisor：Prof．LijunSunSpeciality：ObstetricsandGynecologyCultivateTheSecondClinicalCollegeofZhengzhouUn

2、iversityMay2013原创性声明本人郑重声明所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者丢硼莠日期功廖年‘月∥日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和节阅；本人授权郑州大学可以将本学位论

3、文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者丢劲秀日期奶年石月歹Et摘要辅助生殖技术子代印记基因PEGl0、L3MBTLl的表达和甲基化状态研究研究生岳丽芳导师孙丽君郑州大学第二临床学院妇产科河南郑州450014背景与目的辅助生殖技术(AI盯)是治疗人类不孕不育的一种常规方法，尽管ART在实施时各项技术已尽量模拟母体受孕内环境的各项条件，但由于ART本身的非生理性操作，可能影响

4、配子和胚胎的发育，甚至增加子代成年期疾病易感性，许多研究也表明ART子代早期流产、围产期疾病及出生低体重的风险增加，但病因仍不清楚。目前对于ART子代安全性的研究多集中在表观遗传方面，认为ART各操作过程可能影响子代的与生长发育相关印记基因的表达，因此了解这些印记基因在ART妊娠期的变化，探索相关机制，可为改善其不良出生结局和后期发育风险做出贡献。PEGl0是位于7q21上的父系表达基因，在胎儿及胎盘生长发育过程中起到重要作用，许多实验也证实PEGl0表达异常，会引起胚胎早期死亡、流产，妊娠期疾病风险增加，同时发现其在多种癌症中激活。L3MBTLl是位于20q13．

5、12上的父系表达基因，其可调节正常和恶性细胞的自我更新，许多实验表明其表达水平正常，对细胞的正常有丝分裂和减数分裂有重要作用，同时其在许多骨髓恶性肿瘤中易缺失。那么这两个印迹基因在ART子代表达如何，其调节机制又是什么，目前研究较少。因此，我们采用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)和甲基化特异性PCR方法(MSP)检测ART子代减胎胚胎、胎盘和脐血中两个基因的表达及甲基化情况，从妊娠早期和晚期的角度分别探讨其表达异常的意义摘要和表达调节机制，为改善其不良出生结局提供新的思路。材料和方法ART组和正常对照组均分为三种组织，即胚胎、胎盘和脐血。收集ART多胎妊娠行减胎

6、术的减胎胚胎和自然妊娠行人工流产的胚胎组织各15例；ART和自然妊娠子代出生时脐血和胎盘各30例。比较两组临床资料；应用QRT．PCR方法检测各组织中目的基因mRNA表达水平并比较；应用MSP方法检测目的基因甲基化状态并比较，结果利用SPSSl7．0软件进行分析，检验水准为萨0．05。挂电皇口7卜1．ART组与正常对照组在母亲的年龄、孕周、新生儿性别和新生儿平均出生体重方面均无显著性差异(尹l>O．05)，但ART组新生儿平均出生体重低于对照组。2．ART组胚胎中PEGl0、L3MBTLlmRNA相对表达量(RQ值)均下调(P<0．05)；脐血和胎盘组织中PEGl0

7、RQ值均上调(尸<0．05)，而L3MBTLlRQ值在胎盘组织中下调(P<0．05)，在脐血中无差别(尸>O．05)。3．ART组中，PEGl0RQ值在三种组织问比较，胎盘和脐血均高于胚胎组织(尸<0．05)，而胎盘和脐血之间无差异(尸=0．296)；L3MBTLlRQ值在三种组织间比较无差异(P=0．088)。4．ART组胚胎中PEGl0、L3MBTLl启动子区甲基化阳性率均高于正常对照组(P