遗传印记基因PEG10在早期妊娠和难免流产蜕膜组织的表达研究

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1、重庆医科大学硕士学位论文遗传印记基因PEG10在早期妊娠和难免流产蜕膜组织的表达研究姓名：梁小妍申请学位级别：硕士专业：遗传学指导教师：何俊琳20080501重庆医科大学硕士研究生学位论文ISHLSCMDABNBTPBSTH202TaqNPhybridizationinsituLaserscanningconfocalmicroscopydiaminobenzidinenitrobluetetrazolium原位杂交激光共聚焦二氨基联苯胺四唑硝基蓝Phosphatebufferedsolution磷

2、酸盐吐温缓冲With0．05％Teen．2Hydrogenperoxidethermosaquaticus(DNApolymerase)normalpregnantwomenSPSSStatisticalpackageforthesocilscinceTNF．仅TGF-fltumornecrosisfactoratransforminggrowthfactorp2液过氧化氢耐热DNA聚合酶正常妊娠妇女社会科学统计软件包肿瘤坏死因子a转化生长因子13重庆医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的

3、论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意．申请学位论文与资料若有不实之处，’本人承担一切相关责任．学位论文储始蕴遗魄坦垒：丝：迦学位论文版权使用授权书本人完全了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属重庆医科

4、大学．本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为重庆医科大学．学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅．学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，可以采用影印、缩印或其他手段保存论文．论文作者签名：指导教师签名：日期：重庆医科大学硕士研究生学位论文遗传印记基因PEGIO在早期妊娠和难免流产蜕膜组织表达研究摘要目的：通过检测父方来源而母方印记的遗传印记基因阳GJ『p(paternallyexpressedgene10)在正常早期妊娠妇女

5、和难免流产患者蜕膜组织中的表达水平及其组织学定位，研究PEGIO在正常早期妊娠及难免流产蜕膜组织的表达规律，探讨其在自然流产中的作用，并为难免流产病因的深入研究提供新的思路。方法：选取2006年10月至2007年8月在重庆医科大学第一附属医院妇产科门诊自愿接受人工流产术中止妊娠的正常早孕妇女和难免流产患者，其中正常早孕60例，停经6~11周，每孕周组各10例，年龄20-32岁，经妇科检查、B超证实为宫内妊娠且符合孕周；难免流产患者40例，停经6-9周，每孕周组lO例，年龄20～35岁，经妇科检查、B

6、超诊断而确认为难免流产胚胎停育者(包括胚囊小于孕周或未见胚芽或未见原始心管搏动)。在无菌条件下获取她们的妊娠蜕膜组织，提取总RNA并留取部分新鲜组织用4％的多聚甲醛固定。分别采用半定量逆转录聚合酶反应(RT-PCR)、原位杂交、免疫印迹(Westernblotting)、免疫组织化学及激光共聚焦技术检测蜕膜组织PEGIO重庆市科委重点项目(渝科发计宇[2004147号)资助重庆医科大学硕士研究生学位论文mRNA及蛋白的表达水平与组织定位。结果：1．RT-PCR显示PEGIOmRNA在各孕周蜕膜组织中

7、均有表达，且表达量随孕周增加逐渐上调。在妊娠第6周表达量较低(0．6743+0．114)，随后表达量上升(第7周O．73494-0．0083)，至第8周达高峰(O．73544-0．0074)，继而出现下调趋势(第9周O．6340+0．0084、第10周O．59014-0．0089、第11周O．52614-0．0112)；而在孕6-9周难免流产蜕膜组织中表达量明显下降，和同期正常早期妊娠各孕周组相比均具有显著性差异(氏O．05)。2．原位杂交分析PEGIOmRNA的表达规律与RT-PCR结果相吻合。其

8、阳性信号定位于间质和胞质及腺上皮，呈散在、局灶或弥漫状分布，以腺上皮表达最强，为紫蓝色细砂样至黑紫色粗颗粒状；胞质次之，间质最弱。而在孕6~9周难免流产蜕膜组织中腺上皮呈弱蓝色，胞质、间质几乎无阳性着色信号。3．免疫组化、激光共聚焦、Westernblot亦显示PEGIO蛋白表达规律与其mRNA表达规律相符。IHC显示，PEGIO表达定位于在蜕膜间质细胞和腺上皮细胞胞浆，胞核不表达。正常妊娠6--1l周蜕膜组织PEGIO表达强度为(卅)一(卅)一(卅)，而在孕6-9周