牛3个候选印记基因的组织表达及印记状态分析

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1、万方数据分类号：Q三垒!密级：公珏单位代码：!QQ墨鱼学号：2Q!!Q2墨牛3个候选印记基因的组织表达及印记状态分析Tissuepressi0Id"printedstatuslissueexpresslcnanimprInteoStaUSIofthreecandidatedimprintedgenesincattle学位申请人：赵姝君指导教师：李世杰教授学科专业：生物化学与分子生物学学位类别：理学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二O一四年五月三十日万方数据独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行

2、的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得河北农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：双蛛镌签字日期：加l斗年6月‘日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解河北农业大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权河北农业大学可以将学位论文的全部或

3、部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：欺姝覆签字日期：孙l叶年‘月(日学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：导师签名：莒侈杰签字日期：劢I＼c年厂月／FI电话：邮编：万方数据摘要基因组印记是一种不遵循孟德尔定律的遗传学现象，是指等位基因通过DNA或组蛋白的表观遗传修饰而产生的亲本基因差异表达的现象。父源等位基因沉默，而母源等位基因激活的基因称为父源印记基因；反之，母源沉默父源激活的基因称为母源印记基因。目前

4、，印记基因的研究主要集中在人和小鼠中，被鉴定的印记基因总数超过200个，而牛中印记基因的研究相对较少，已经确认的只有34个(11tlp：／／igc．otago．ac．nz／Search．html)。印记基因在染色体上成簇分布且高度保守。Cdknlc-Kcnqlotl印记域中的印记基因，与Beckwith—WiedemannSyndrome和个体健康的生长发育有密切联系。本研究选取Cdknlc-Kcnqlotl印记域中在鼠中被鉴定为母源表达的Cdknlc、Phlda2和Napll4印记基因为研究对象，通过RT-PCR

5、方法分析了Cdknlc、Phlda2和Napll4基因在成年牛组织中的表达状态。结果表明，Cdknlc基因在成年牛的心、肝、肺、脾、骨骼肌和脂肪6个组织表达，Napll4基因在成年牛的心、肝、脾、肺、肾、骨骼肌和脂肪7个组织都表达，脚胁2基因在成年牛的肝、脾、肺、肾和骨骼肌5个组织都表达。本研究应用基于SNP(singlenucleotidepolymorphism，SNP)位点的测序法分析等位基因的表达。首先利用PCR产物直接测序的方法寻找Cdknlc、Phlda2和Napll4基因的SNP位点，确定杂合子。在C

6、dknlc基因第二外显子的129bp位置上找到一个(C／G)SNP位点，在Napll4基因第十五外显子的335bp位置上找到一个(A／T)SNP位点，在砌姚2基因第二外显子的68bp位置上找到一个(Aff)Sr,a'位点，通过RT-PCR产物直接测序法检测Cdknlc、Phlda2和Napll4基因在杂合子牛中等位基因的特异性表达。发现Cdknlc基因在成年牛的心、肝、肺、脾、骨骼肌和脂肪6个组织中表现为单等位基因表达，而Phlda2和Napll4基因在成年牛组织中呈双等位基因表达。关键词：牛；印记基因；组织表达；

7、印记状态万方数据TissueexpressionandimprintedstatusofthreecandidatedimprintedgenesincattleMastercandidate：ZhaoShuJunMajor：BiochemistryandmolecularbiologySupervisor：LiShijieAbstractGenomieimprintingrefersthedifferentexpressionofpaternalandmaternalallelesinoffsprings，mor

8、especifieally，somegenesonlyexpressfromtheirpatemalallelesandtheirmaternalalleleskeepsilencewhilesomeothergenesexpressonlyfromtheirmaternalallelesandthepaternalalleleskeepsilenee．Th