牛Meg8基因的克隆、组织表达及印记状态分析.pdf

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1、分类号：Q三垒!密级：公珏单位代码：!QQ墨鱼学号：—200—8088牛Me98基因的克隆、组织表达及印记状态分析—一’l■·‘●l‘·1·Ulonin2[，tiSSUeexoresslonannimprmtenstatuSofMe98geneincattle学位申请人：侯晓慧指导教师：李世杰教授学科专业：生物化学与分子生物学学位类别：理学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二。一一年六月四日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已

2、经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑宴垦壅些盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑些盔些盘堂有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权塑兰垦盎些盘鲎可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文

3、作者签名：签字日期：年月日学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：翩签名：粕互签字日期：年月日电话：邮编：摘要

4、II[1lrIIIIIlllllIIlY1897523基因组印记是一种表观遗传现象，来自亲本的等位基因或染色体在发育过程中产生专一性的加工修饰，导致后代细胞中两个亲本来源的等位基因有不同的表达活性，具有这种亲本差异性表达现象的基因称为印记基因。Dlkl-Di03区域是在哺乳动物中相对保守的一个印记基因簇，该区域内的印记基因参与调控胚胎、胎盘发育和肌肉形成。Dlkl-Di03印记区域在人和鼠中研究的较多，由于基因序列及多态信息的

5、限制，在牛中相关报道较少。本研究选取Dlkl-Di03印记域中在鼠和羊中被鉴定为母源表达印记的Me98基因为研究对象。首先采用RT-PCR和RACE方法得到该基因的eDNA序列(GeIlebaIll(登录号：HQ407410．HQ407422)。序列分析表明牛Me98基因至少存在12种可变剪接形式，DNA序列全长约43kb，eDNA序列全长1062bp，包括7个外显子，外显子表现出与羊高度的相似性(82．8*／',-．-97．7％)。牛Me98基因5’侧翼区未发现与Kozak规则相匹配的翻译起始序列，推测该基因是一种非编码RNA，可能作为一

6、种RNA调解分子调控靶基因的转录。以上研究结果将为进一步分析该基因的生物学功能以及揭示其分子调控机制奠定基础。通过RT-PCR方法分析了Me98基因在成年牛各个组织中的表达情况，结果表明，Me98基因在成年牛的心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉和脂肪都表达RNA，未表现出在鼠和羊中所报道的组织特异性。印记基因的表达是基于基因的单等位基因表达，为了研究基因是单等位基因表达还是双等位基因表达，必须找出一个表达的多态，并且要求被研究的动物是杂合子，由此能辨别是哪一个亲本基因被转录。哺乳动物基因组中最常见的多态是SNP，包括DNA点突变，即碱基对的插入或

7、缺失，可以在基因组水平上检测出这种突变。SSCP技术是一种简单、快速、可重复性好的方法，广泛用于寻找基因突变和DNA分型。本研究首先应用PCR．SSCP方法寻找Me98基因中表达的多态，鉴定杂合子，通过RT-PCR及直接测序法分析杂合子牛的心、肝、脾、肺、肾、大脑、肌肉和脂肪组织中该多态位点的表达情况。研究结果表明Me98基因在成年牛被检测的八个组织中均表现为单等位基因表达，表明Me98基因在牛中为印记基因。关键词：牛；Me98基因；可变剪接体；表达；印记状态placentalandmusclegrowth．Dlkl-Di03imprint

8、eddomainhasbeenwidelystudiedinmouseandhuman．Butduetothelackofsequenceandpolymorphisminformationincodingregions，fewimprintedgeneshavebeenreportedinearle．Inthisstudy,weclonedtheeDNAsequenceandanalyzedtheexpressionandimprintedstatusofMe98gene,whichisidentifiedasamaternallyexp

9、ressedgeneinbothmouseandsheep．TheeDNAsequenceswereobtainedbyRT-PCRandRACE(GenBankaccessio