褪黑素对小鼠缺血再灌注脑损伤后海马ca3区的保护作用

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1、2013届硕士研究生学位论文褪黑素对小鼠缺血再灌注脑损伤后海马CA3区的保护作用中图分类号：R322.81单位代码：10660学号：T10660S100023贵阳医学院2013届硕士学位论文褪黑素对小鼠缺血再灌注脑损伤后海马CA3区的保护作用研究生：肖朝伦导师：余资江教授年级：2010级专业：人体解剖与组织胚胎学2013年5月1日2013届硕士研究生学位论文褪黑素对小鼠缺血再灌注脑损伤后海马CA3区的保护作用目录摘要„„„„„„„„„„„„„„2前言„„„„„„„„„„„„„„4材料与方法„„„„„„„„„„„„4结果„„„„„„„„„„„„

2、„„10讨论„„„„„„„„„„„„„„20结论„„„„„„„„„„„„„„25参考文献„„„„„„„„„„„„„26英文摘要„„„„„„„„„„„„„30致谢„„„„„„„„„„„„„„32略缩词表„„„„„„„„„„„„„33论文原创性声明„„„„„„„„„„34附：综述„„„„„„„„„„„„3512013届硕士研究生学位论文褪黑素对小鼠缺血再灌注脑损伤后海马CA3区的保护作用褪黑素对小鼠缺血再灌注脑损伤后海马CA3区的保护作用专业名称人体解剖与组织胚胎学研究生肖朝伦指导老师余资江教授摘要：观察褪黑素（Melatonin，MT）对缺血再

3、灌注脑损伤小鼠行为学及海马CA3区神经元和胶质细胞的形态学变化，探讨MT对缺血再灌注脑损伤小鼠的神经保护作用。方法：随机将60只健康小鼠分为假手术组，模型7d组和模型治疗7d组。模型组采用双侧颈总动脉夹闭法建立小鼠缺血再灌注脑损伤，模型治疗组分别于处死前3天腹腔注射MT（20mg/kg，3次/天），假手术组同时给予等量生理盐水。各组小鼠于处死前3天采用Y-型迷宫检测小鼠学习记忆能力，于行为检测完毕后行脑组织超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase,SOD)、一氧化氮（NO）、丙二醛(Maleicdialdehyde，MDA)及脑

4、组织含水量检测；透射电镜下观察海马CA3区神经元和胶质细胞超微结构的变化。利用免疫组织化学和蛋白印迹技术，探讨各组小鼠海马CA3区神经元特异性烯醇化酶（Neuronspecificenolase，NSE）、胶质原纤维酸性蛋白（GlialFibrillaryAcidicPortein，GFAP）、半胱氨酸蛋白水解酶-2、3（caspase-2、3）蛋白表达的变化。结果：1、与模型组相比，MT治疗组小鼠的学习记忆能力明显改善（P<0.05）；2、MT治疗组SOD含量显著升高，NO、MDA含量明显下降；3、电镜下，MT治疗组较非治疗组海马神经元的损

5、伤明显改善。4、免疫组化染色显示治疗型组小鼠海马CA3区NSE阳性细胞较模型组明显增多（P<0.05），阳性反应产物平均光密度增高（P<0.05），同时蛋白印迹结果显示经治疗MT后小鼠海马CA3区NSE蛋白含量增多（P<0.05）；5、免疫组化染色显示治疗型组小鼠海马CA3区GFAP阳性细胞较模型组明显减少（P<0.05），阳性反应产物平均光密度降低（P<0.05），同时蛋白印迹结果显示MT治疗组小鼠海马CA3区GFAP蛋白含量降低（P<0.05）；6、免疫组化染色显示治疗型组小鼠海马CA3区caspase-2、3阳性细胞较模型组明显减少（P

6、<0.05），阳性反应产物平均光密度降低（P<0.05），同时蛋白印迹结果显示MT治疗组小鼠海马CA3区caspase-2、3蛋白含量降低（P<0.05）；结论：褪黑素可以明显改善缺血再灌注脑损伤小鼠的学习记忆能力，使脑组织中NO、MDA含量降低、SOD含量升高，不同程度的减轻神经元的损害，抑制星形胶质细胞反应性增生，同时可22013届硕士研究生学位论文褪黑素对小鼠缺血再灌注脑损伤后海马CA3区的保护作用能参与抑制神经细胞凋亡，初步证实其具有神经保护作用。关键词：褪黑素；超微结构；学习记忆；神经元特异性烯醇化酶；胶质原纤维酸性蛋白；半胱氨酸蛋

7、白水解酶-2；半胱氨酸蛋白水解酶-3；免疫组化；蛋白印迹；海马32013届硕士研究生学位论文褪黑素对小鼠缺血再灌注脑损伤后海马CA3区的保护作用前言缺血再灌注脑损伤可引起迟发性神经元死亡，临床资料显示，这种缺血性脑损伤的病人会有不同程度的认知功能障碍，甚至会引发严重的残疾，给个人、家庭、社会带来沉重的负担。脑缺血再灌注损伤会发生一系列复杂的病理生理学改变，过去研究重点主要集中于氧自由基损伤、兴奋性氨基酸损伤和钙超载等方面。随着分子生物学技术的发[1]展，研究发现炎性反应和细胞凋亡在脑缺血再灌注损伤机制中也扮演着重要的角色。脑缺血后的氧化应激损

8、伤不但可以直接损伤细胞，导致细胞坏死，还可以介导多种途径间接导致细胞凋亡，在神经细胞的损伤过程中起重要作用，是目前神经科学关注的热点[2]。近年来对褪黑素（mela