褪黑素对缺血再灌注所致神经元凋亡的保护作用研究

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1、Y961186分类号UDC孝中斜荻大署硕士学位论文密级褪黑素对缺血再灌注所致神经元凋亡的保护作用研究申请人姓名：指导教师：学科专业：研究方向：学位授予单位：论文起止日期：卢涛王西明教授陈蓓蓓教授生物化学与分子生物学神经生化华中科技大学同济医学院2001年9月～2005年10月同济医学院研究生部二o0五年十一月华中科技大学同济医学院学位论文褪黑素对缺血再灌注所致神经元凋亡的保护作用研究摘要目的探讨模拟缺血再灌注(imitativeischemia．reperfusion，IIR)引起神经元凋亡的途径和褪黑素(me

2、latonin，MT)抗凋亡的作用机理。方法(1)建立原代培养大鼠小脑颗粒细胞的体外模拟缺血(OxygenGlucoseDeprivation，OGD)再灌注模型；(2)利用HOech33258细胞染色以及测定培养液LDH活性，观察OGD后再灌注对细胞的损伤情况；f3)细胞DNA琼脂糖凝胶电泳，观察OGD后再灌注后细胞的损伤情况；(4)利用Rhodaminel23和激光共聚焦显微镜观察线粒体膜电位的变化：f5)ELISA检测细胞浆中细胞色素c水平。(6)并用上述指标观察MT对其损伤的保护作用。结果(1)在体外模

3、拟缺血再灌注细胞模型中，HOech33258染色细胞明显出现部分神经原肿胀和坏死，MT可减轻细胞的肿胀和坏死；(2)OGD后再灌注培养液中LDH活性增加(P

4、II■■■■r【‘h■■■●■——_————————————————————————————————————————————————————_——————————————一一华中科技大学同济医学院学位论文径：(2)MT可通过阻止线粒体凋亡途径而抑制模拟缺血再灌注诱导小脑颗粒细胞的凋亡而起到保护作用。关键词褪黑素；小脑颗粒细胞；缺血再灌注；线粒体；细胞凋亡华中科技大学同济医学院学位论文Therolesofmelatoninprotectingneuronsfromapoptosisundergoingischem

5、ia—reperfusioninjuryAbstractObjectiveToexplorewhethermelatonin(MT)cadprotectneuronsfromapoptosisinducedbyischemia—reperfusioninjuryanditsmechanismMETHODS(1)SDratcerebellargranulecellswereislatedandcultured，andmimicischemia—reperfusionmodelwasestablishedbyoxy

6、gen—glucose—depriVation(OGD)invitro(2)UsingthecelldyeingbyHoech33258andthemensurationofLDHactivitytodeterminethecelldamageafterreperfusing(3)DNAgelelectrophresiswereperformedtodeterminethecellapoptosisafterreperfusing．(4)Themeasurementofmitochondrialmembrane

7、potentiometerwasusedRhodaminel23andlaserCO—focusmicroscope(5)CytochromeCwasassayedbyELISA(6)ObservetheeffectofMTprotectingthecellfromdamagebuyOGDtestabove3●_-__●—●-__●___●—————___-____———______——_-_____——●_——●___-●———————————————————————————华中科技大学同济医学院学位论义RE

8、SUIjrS(1)Inthemimicischemia—reperfusionmodelofcerebellargranulecells，ThecelldyedbyHoech33258appearswellandputrescenceinpartofthecellandMTcanlightenobviouslythephenomenaabove(2)InOGDtest，theLDHac