MIPU1对阿霉素所致HEK293细胞凋亡的保护作用

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1、中图分类号幽UDC610硕士学位论文学校代码!Q曼33密级坠i巫一MIPUl对阿霉素所致HEK293细胞凋亡的保护作用ProtectiveEffectofMIPU1onDoxorubicin—inducedApoptosisinHEK293Cells作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：时春丽基础医学病理学与病理生理学基础医学院涂自智论文答辩日期型：三兰、答辩委员会主中南大学2013年5月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特另tl：Di：i以标

2、注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：望立盎函日期：旦年—￡月±L日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数

3、据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：煎叠蓟导师签名期：旦年』月卫目本课题受如下基金资助：·国家重点基础研究发展计划(973计划)：2007CB512007·国家自然科学基金面上项目，项目编号：30971205MIPUl对阿霉素所致HEK293细胞凋亡的保护作用摘要：目的：阿霉素(Doxorubicin，DOX)是临床上用于治疗肿瘤的化疗药物，但是阿霉素存在很大的毒副作用，如阿霉素心肌病，阿霉素肾病等。这些毒副作用主要和细胞凋亡有关。Mipul是本科室发现的一个缺血预适应诱导表达上调的新基因(GenBank登录号为AY

4、221750)，并己证实Mipul是一种KRAB型锌指蛋白，具有转录抑制作用。通过生物信息学比对，发现Mipul结构上十分保守，在啮类动物和人之间具有相当高的同源性。同时发现凋亡相关基因Bax、Bcl．2、P53、Bid、Bak等的启动子区含有Mipul的核心结合位点。然而，Mipul是否可以在转录水平调节上述凋亡相关基因表达，从而减轻DOX的细胞毒性作用并不清楚。因此，本研究拟在探讨MIPUl对DOX所致细胞凋亡的影响及其可能的分子机制，以期为深入阐明新基因Mipul的生物学功能提供新的证据，为预防DOX抗肿瘤治疗过程中的毒副作用

5、提供新的思路。方法：本次实验以DOX诱导人胚胎肾细胞(脏勉93)凋亡为模型fl】，通过瞬时转染MIPUl真核表达质粒pEGFP-MIPUl，使细胞过表达MIPUl。实验分为四组，即pEGFP组、MIPUl组、pEGFP+DOX组和MIPUI+DOX组。(1)采用MTT实验观察DOX处理下MIPUl过表达对细胞存活率的影响；(2)采用Hoechst33258染色、Caspase．3活性检测和流式细胞术分析MIPUl过表达对DOX所致细胞凋亡的影响；(3)采用Westernblot和RT．PCR分析MIPUl过表达对DOX所致抗凋亡基因

6、Bcl．2、促凋亡基因P53和Bax在蛋白和mRNA水平表达变化的影响；(5)采用双荧光素酶报告基因分析MIPUl对Bax启动子活性的影响。结果：(1)HEK293细胞经过DOX处理后细胞存活率明显下降(p<0．O1VSpEGFP)；当转染pEGFP．MIPUl使细胞过表达MIPUl后，DOX所致的细胞死亡被明显抑制(尸

7、(3)DOX处理HEK293细胞后，Bcl．2的表达明显减少(尸<0．05VSpEGFP)；但是过表达MIPUl后Bcl．2的表达则明显增多(P

8、响(P