肾损伤分子-1在单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中表达及雷帕霉素对其表达的影响

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1、目录IIlllllllll111111IIlY2337735中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文肾损伤分子一1在单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中的表达及雷帕霉素对其表达的影响前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8日U看⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯芍材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·8结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯45结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49综述雷帕霉素在非移植肾肾病中抗肾间质纤维化中的作用机制⋯52致{射⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯59个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯60中文摘要肾损伤分子一1在单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中的表达及雷帕霉素对其表达的影响摘要目的：肾间

3、质纤维化(renalinterstitialfibrosis，RIF)是所有慢性肾脏病的共同结果，同时也是造成肾功能不可逆性损害的原因之一，延缓甚至逆转肾间质纤维化对于延缓慢性肾脏病的进展、延长患者寿命意义重大。肾损伤分子(kidneyinjurymoleculel，KIM．1)是一种新型的I型跨膜糖蛋白，在正常大鼠肾组织仅有极微量的表达，而在多种急性肾损伤模型中，如缺血再灌注损伤、中毒性肾损伤、造影剂肾病等中表达明显增加，且随肾脏结构和功能的修复其表达消退，因其在急性肾损伤诊断中灵敏性和特异性较高，目前成为一种较好的急性肾损

4、伤的生物学标记物。同时也有研究发现KIM．1在慢性肾脏病(chronickidneydisease，CKD)时也有表达，已在蛋白超负荷肾病模型、阿霉素肾病、血管紧张素1I诱导纯合子Ren2大鼠肾损伤及多囊肾模型中得到证实，然而在CKD中KIM．1表达的具体分子机制及病理生理学意义尚不清楚。国内有学者分别观察了KIM．1和缺氧诱导因子．1(hypoxia-induciblefactor1alpha，HIF．1a)在造影剂肾病大鼠模型和人近端肾小管上皮细胞(HK2)缺氧复氧过程中的表达情况及相互关系，结果均提示二者之间可能存在一定

5、联系，KIM．1可能作为HIF．1et的下游靶点参与肾脏损伤和修复过程。本课题拟通过建立单侧输尿管梗阻(unilateralureteralobstruction，UUO)大鼠肾间质纤维化模型，观察肾组织的病理改变，结合免疫组织化学、PCR等检测手段，观察KIM．1、HIF—la及a-SMA在肾间质纤维化大鼠肾组织中的表达变化以及应用HIF—la抑制剂雷帕霉素后对其表达的影响，并进一步探讨KIM-1与HIF．1tt、ft-SMA的相互关系以及雷帕霉素对UUO大鼠的肾脏保护作用，为临床防治慢性肾脏病的进展提供实验性理论依据。方法

6、：健康清洁级雄性SD大鼠72只，体重2004-209，随机分为假手术组(Sham组)，模型组(UUO组)，治疗组(Rap组)，每组24只。UUO组和Rap组行左侧输尿管结扎并剪断，建立UUO模型；Sham组仅游离左侧输尿管，但不结扎和剪断。各组于手术前l天开始给药，根据体中文摘要重调整药量，Rap组以雷帕霉素2mg／kg／d灌胃，Sham组与UUO组以等容积生理盐水灌胃，直至术后第14天。各组分别于术后1、4、7、14天随机处死6只大鼠，取左侧肾组织，一部分置于4％多聚甲醛中，用于HE染色观察病理改变，免疫组化染色法检测ⅪM．

7、1、HIF—la及0【一SMA蛋白的表达，另一部分置于液氮中快速冷冻，随后转至一80。C冰箱中保存，用于RT-PCR法检测各因子的mRNA水平，然后分别采用图像分析系统和凝胶成像系统进行半定量分析。应用SPSSl3．0统计分析软件对实验数据进行统计学处理，P<0．05为有统计学意义。结果：1实验大鼠肾组织形态学变化Sham组大鼠两侧肾脏大小相当，外观无明显差别；UUO组和Rap组梗阻侧肾脏体积大于对侧，且随梗阻时间的延长体积逐渐增大，可见肾实质较对侧明显变薄，颜色变浅，肾盂肾盏扩张变形，肾内积水，尤以术后14天最为显著。光镜下

8、观察发现Sham组肾小球和肾小管结构均未见明显异常，UUO组和Rap组术后1天肾组织病理改变不明显，从术后4天病变较明显，开始出现肾小管扩张，肾小管上皮细胞刷状缘脱落，炎症细胞浸润，肾间质水肿，且随着梗阻时问延长，病变逐渐加重。与UUO组相比，Rap组大鼠肾组织病理学变化较轻