米诺环素对大鼠视神经损伤视网膜神经节细胞和小胶质细胞表达的影响

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1、目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文米诺环素对大鼠视神经损伤视网膜神经节细胞和小胶质细胞表达的影响前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．8日【J舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．8材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12附图⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯14-附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．24讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30综述米诺环素与视神经视网膜疾病的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．34致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．44个人简历⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯45中文摘要米诺环素对大鼠视神经损伤视网膜神经节细胞和小胶质细胞表达的影响摘要目的：视神经损伤，临床疗效差，其再生和功能恢复一直是眼科临床及科研亟待解决的难题。目前研究主要集中在其损伤后早期药物运用，尽管抗氧化剂、神经节苷脂等对恢复视功能有一定作用，但药物副作用、疗效欠佳等因素限制了其广泛应用。使得关于视神经损伤保护的研究进展缓慢。米诺环素(minocycline)为第二代半合成四环素衍生物，现在以较强的抗菌作用广泛应用于临床。近年来多项研究显示，米诺环素除具有抗炎、免疫

4、抑制作用外’，在多种神经疾病模型中显示出一定神经元保护作用【1】。但米诺环素对视神经损伤再生的作用尚不清楚，相关研究报道罕见。本研究通过建立大鼠视神经损伤模型，应用米诺环素进行干预，观察米诺环素对视神经损伤后视网膜神经节细胞(retinalganglioncells，RGCs)的保护作用及对视网膜小胶质细胞(表面标记物为CDllb)、肿瘤坏死因子(n妤一0【)表达的影响，探讨米诺环素对大鼠视神经损伤再生的作用及可能存在的保护机制，以求在促进视神经损伤后再生方面寻找新的治疗药物，拓宽米诺环素在临床的应用。为l临床应用提供实

5、验依据。方法：雄陛清洁级SD大鼠60只，体重(200-士20)g，行外眼、眼底检查无病变者纳入实验。随机分为正常对照组(正常组)12只(24眼)、实验对照组(对照组)24只(24眼)、实验治疗组(治疗组)24只(24眼)。后两组建立视神经损伤模型，从造模后1小时开始，每曰一次，对照组给予生理盐水45mg／kg腹腔注射，治疗组给予米诺环素45mg／kg腹腔注射。在伤后1天、4天、7天、14天四个时间点分别取材，正常组3只大鼠双眼眼球、后两组6只大鼠右眼眼球摘除，取视网膜组织固定切片，以视盘上方2mm的视网膜作为观察对象。H

6、E染色，光学显微镜观察视网膜形态学改变，同时计数RGCs存活数量，免疫组化染色观察CDllb及TNF—a的表达情况，计算机图像分析行半定量检测平均光密度值(averageopticaldensity，AOD)，以免疫阳性染色的AOD表示抗原表达量，AOD值越高阳性表达越强。统计结果用均数4-标准差来表示，实中文摘要验数据利用SPSS13．0软件包，进行统计学分析。同一组内的不同时间点的数据运用单因素方差分析(ANOVA)，不同组间的同一时间点数据运用配对t检验。P<0．05差异有统计学意义，P<0．01差异有显著统计学意

7、义。结果：1视网膜组织HE染色、光镜结果1．1形态学改变正常组：视网膜神经节各细胞层、内核层及外核层的细胞排列致密，结构清晰，边界清楚；对照组：各时间点RGCs数目迅速的减少，在损伤早期，部分细胞可出现水肿及空泡样变化，随着损伤时间延长，大鼠视网膜神经节细胞层的胞核明显变稀疏、变薄且排列紊乱，内核层矛NJ,I-核层也不同程度的减少；治疗组亦可见上述改变，但其各时间点均较对照组的各时间点损伤轻，各时间点大鼠视网膜细胞核排列可，尚整齐，稀疏程度及空泡样改变均较对照组轻。1．2RGCs数量改变正常组平均RGCs数无明显差异；对

8、照组1、4、7、14天平均RGCs数为22．543士1．559、13．971+1．150、9．971+1．175、5．800+1．106个；治疗组l、4、7、14天平均RGCs数为24．771士1．262、15．886士1．388、12．829士1．339、7．714+1．296个(每x400倍光镜视野)。由此可见，