米诺环素对大鼠肢体缺血在灌注继发肺损伤的影响

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1、原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：秘深嗍：硇。年Ⅳ夕同学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印

2、、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作椽荐埽噪日期：翮口年t月摘要米诺环素对大鼠肢体缺血再灌注继发肺损伤的影响摘要肢体缺血再灌注所继发肺损伤的表现是急性肺损伤(Acutelunginjury，ALI)和成人呼吸窘迫症(Adultrespiratorydistresssyndrome，ARDS)，在急救医学中是发病率和死亡率都很高的一种并发症。ALI是ARDS病程早期阶段，指机体遭受严重感染、创伤、休克等打击后，出现以弥漫性肺泡毛细血管膜损伤

3、导致肺水肿和肺不张等病理特征，临床上的表现是呼吸窘迫，伴有顽固性低氧血症、肺顺应性下降和扩散性炎症浸润，进行性加重表现为ARDS，其病死率高达45％一50％。因此积极防治本类疾病在急危重领域具有非常重要的意义。目的本实验利用大鼠下肢缺血／再灌注产生大量炎性介质导致远隔器官肺损伤模型，观察治疗剂量的盐酸米诺环素，对缺血再灌注所引起的肺组织中自介素一6的变化，肺组织基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶一9，和肺的干湿比变化，结合组织病理改变，进一步探讨盐酸米诺环素对肢体缺血／再灌注后远隔器官肺损伤的保护作用及其机制，为盐酸米诺环素在肺脏保护方面的临床应用提供实验支持。材料与方法30只SD成年

4、雄性大鼠(郑州大学实验动物中心提供，体重2309+30)随机分为三组，模型组(M组，n=lO)、生理盐水组(NS组，n=10)和米诺环素干预组(C组，n=10)。实验大鼠不限制活动，自由进食，进水。三组大鼠乙醚吸入麻醉后，生理盐水组待自然清醒；大白鼠NS组，M组，经大鼠尾静脉注入生理盐水1．0ml；C组，米诺坏素按公斤体重10mg(约1．Oml)由大鼠尾静脉注射入体内；M组和C组分别结扎大鼠双下肢，以结扎后双下肢变白为缺血成功标摘要志；3h后M组C组大鼠双下肢结扎线去除，按摩大鼠双下肢以皮肤色泽转为红润为肢体再灌注成功标志。再灌注成功4h后三组均使用5％水合氯醛腹腔注射麻醉后，依次剪开

5、胸腔，胸骨，暴露肺脏，迅速结扎右肺门，切除右肺，取右肺上叶测量干湿比，中叶置于一80℃冰箱中待用，右肺下叶置电镜保护液中行透射电镜观察。经右心耳进行生理盐水灌洗，左肺经生理盐水灌沈变白后用甲醛适量灌洗，切去左肺下叶置于甲醛中浸泡，制备蜡块，切片，HE染色观察，免疫组化观察基质金属蛋白酶．2和基质金属蛋白酶．9的在肺组织的着色及灰度对比。娃里；口木1．肺组织含水量的改变：M组肺组织含水率明显高于NS组(P

6、肺泡腔内有大量红细胞；C组肺间隔仅轻度增宽，少量中性粒细胞浸润无肺不张或肺出血。电镜观察，NS组肺毛细血管基底膜较完整，肺泡II型上皮细胞呈椭圆型或圆形，游离面微绒毛及板层体较完整，胞浆丰富。M组见到肺毛细血管基底膜连续性中断，内皮细胞间隙增宽，毛细血管内皮细胞肿胀，肺泡II型上皮细胞微绒毛破坏程度严重，微绒毛可见变短、减少甚至消失，II型上皮细胞板层体排空。C组游离面微绒毛破坏轻，损伤程度介于NS组与M组。3．免疫组化SP法，肺组织中MMP．2，MMP．9的表达：免疫组化切片以平均光度、平均灰度、阳性面积、阳性单位为指标进行半定量分析。NS组平均光密度值，与M组平均光密度值相比(P<

7、O．01)，差异有统计学意义。M组平均光密度值>C组平均光密度值>NS组平均光密度值(P