白纹伊蚊mir-252对登革病毒e蛋白表达及登革病毒复制的调节作用

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1、南方医科大学2009级博士学位论文白纹伊蚊miR-252对登革病毒E蛋白表达及登革病毒复制的调节作用miR一252oftheAsiantigermosquitoAedesalbopictusregulatesdenguevirusreplicationbysuppressingthe一●一‘‘一●’●⋯一●-‘-exDresslonoIthedengueVlrusenvelopeprotein课题来源：NSFC-广东省联合基金(U0832004)学位申请人导师姓名专业名称培养类型培养层次所在学院÷骜口，{≥陈晓光病原生物学委托培养、学术型博士研究生公共卫生与热带

2、医学学院2013年04月18日广州博士学位论文白纹伊蚊miR-252对登革病毒E蛋白表达及登革病毒复制的调节作用博士研究生：言慧导师：陈晓光教授摘要背景：登革病毒(denguevirus，DENV)是地理分布最广的虫媒黄病毒，按抗原性可分为DENV-1"-'DENV-4四个血清型，同一血清型内又可分成不同的基因型。登革病毒的基因组为单股正链RNA分子，具有感染性，分子量为3,800kDa，约含11，000个碱基。在病毒基因组5"-UTR和37．UTR之间为病毒的单一开放读码框架(openreadingframe，ORF)，编码一个约含3400个氨基酸残基的、分子

3、量约380kDa的聚蛋白分子。人感染登革病毒后根据临床表现严重程度，分为登革热(denguefever，DF)、登革出血热(denguehemorrhagicfever，DHF)、登革休克综合征(thedengueshocksyndrome，DSS)。可传播登革病毒的蚊种主要为埃及伊蚊(Aedesaegypti，Ae．aegypti)和白纹伊蚊(Aedesalbopictus，Ae．albopictus)。白纹伊蚊主要分布在亚洲热带、亚热带和部分温带地区，现已传播到北美、南美、欧洲和非洲大陆，对DENV-1"-一DENV-4均高度易感，在我国为登革的主要传播媒介

4、。随着全球气候变暖、生态环境的恶化、虫媒分布区域的扩展，登革的流行范围和频率不断增加。近十年来，登革热在全世界的发病率提高了将近30倍，目前已波及全球100余个国家和地区，主要流行于非洲、南美洲、东南亚和西太平洋地区。自20世纪90年代以来，除海南、福建、浙江和江苏省有登革热爆发外，我国的登革热主要在广东省流行，已成为流行区域面临的社会公共卫生问题。摘要microRNAs(miRNAs)是一类长度为～22核苷酸(nucleotide，nt)的内源性小分子非编码单链RNA，广泛存在于真核生物中，可在转录后水平调节基因的表达，参与调控发育、细胞增值与分化、细胞凋亡、

5、脂类代谢、激素分泌、机体免疫以及肿瘤发生、病毒感染等生理及病理过程。动物细胞中绝大部分miRNA由RNA聚合酶II转录生成miRNA初始转录产物(primarymiRNA，pri．miRNA)，在Pasha／DGR8的协同下，核酸酶Drosha将pri．miRNA切割成miRNA前体(precursormiRNA，pre—miRNA)。pre．miRNA由Exportin．5蛋白从细胞核内运送至细胞质中，然后经胞质内核酸酶Dicer的切割而加工成～22nt的miRNA：miRNA*双螺旋结构。双螺旋结构中的miRNA*通常迅速被降解；另一条57端稳定性较低的链即

6、成熟的miRNA(maturemiRNA)则与Argonaute(Ago)蛋白家族成员结合进入RNA诱导的沉默复合体(RNA．inducedsilencingcomplex，RISC)。miRNA引导RISC结合靶mRNA后在胞浆中积聚于P小体(Pbody)内，miRNA可能在P小体中行使其基因沉默功能。经典的理论认为，miRNA能抑制基因的表达，miRNA利用其57端2～8个碱基的“种子”序列(seedsequence)识别靶基因mRNA37．UTR的互补序列，引起靶基因mRNA的降解或者是翻译抑制。但目前有研究发现miRNA的靶序列也可位于靶基因的57．UT

7、R区和编码区中，rniRNA亦可增强基因的表达。近年的研究提示病毒与宿主在miRNA水平存在相互的调节作用。一方面病毒自身可编码miRNA，利用其促进病毒自身复制与潜伏并抑制宿主细胞抗病毒活性；另一方面宿主细胞编码的大量miRNAs，在调控自身基因表达的同时，可调控入侵病毒的复制。Lecellier等发现哺乳动物细胞的miR．32可抑制I型泡沫病毒(primatefoamyvirustype1，PFV-1)的复制。Pedersen研究者通过序列互补分析发现5种受IFN．B调节的miRNA对HCV复制有明显抑制作用；细胞转染人工合成的miRNA类似物(miRNAm

8、imic)混合物能使HC