登革病毒易感性相关的白纹伊蚊中肠特异性microrna的鉴定、筛选与功能研究

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1、万方数据军事医学科学院研究生学位论文独创性声明秉承军事医学科学院严谨的学风和科研作风，本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下独立进行的研究工作和取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢之处外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得垩蔓医堂型堂陵或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。论文作者签字：数签字日期：出f丝年上月三日军事医学科学院保护知识产权声明本学位论文作者完全了解军事医堂科学院对研究生

2、在学其间撰写的论文知识产权保护的相关规定。本人撰写的论文是在导师具体指导下，并得到相关研究经费支持下完成，其数据和研究成果归属于导师和作者本人，知识产权单位属军事医学科学院。本人保证毕业后，以本论文数据和资料发表论文或使用论文工作成果时署名第一单位仍然为至壹医堂型堂暄。垩蔓医堂型堂院有权保留学位论文及其电子版，通过网站公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文、汇编以供查阅和借阅。。(涉密和延期公开学位论文在解密后适用本声明)论文作者签字：抛签字日期：塑!竺年—￡月土日指导教师签字

3、：妞：室签字日期：生』生年—L月』L日万方数据目录中英文缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．：-j：：：⋯⋯．．1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2Abstract⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．5—12．—L日Ⅱ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．9材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯111材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1l1．1白纹伊蚊⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯111．2病毒株⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．111．3细胞株⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．111．4实验小鼠⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．112主要仪器设备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11

5、3主要试剂及溶液⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯124方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯134．1野生白纹伊蚊的采集、鉴定与实验室驯养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．134．2白纹伊蚊中肠样本的分组与收集⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．154．3乳鼠脑内接种DENV-2与DENV-2鼠脑悬液制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯174．4DENV-2在C6／36细胞中传代⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯174．5DENV-2

6、病毒滴度TCID50的测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯174．6含DENV-2人工血餐制备及蚊虫经口感染实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．184．7白纹伊蚊总RNA提取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．184．8RT-PCR检测蚊虫体内的DENV-2⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一184．9白纹伊蚊中肠总RNA提取(构建小RNA库用)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯194．10白纹伊蚊中肠小RNA建库及高通量测序⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯194．1l白纹伊蚊小RNA高通量测序后的生物信息学分

7、析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯204．12miRNA表达的差异分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一214．13miRNA靶基因预测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一214．14茎环引物qRT-PCR验证miRNA⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯224．15白纹伊蚊C6／36细胞瞬时转染实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．271白纹伊蚊对DENV-2易感性研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

8、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯271．1白纹伊蚊身体和中肠对DENV-2敏感性测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．271．2DENV．2鼠脑悬液与DENV．2人工血餐滴度测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．281．3白纹伊蚊C6／36细胞感染DENV-2模型的建立⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．292白纹伊蚊中肠miRNA高通量测序及生物信息学分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．312．1白纹伊蚊中肠总RNA浓度及RNA完整性分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31