化瘀通络中药对肝纤维化大鼠治疗作用及其对血小板衍生生长因子(pdgf)及ras信号传导通路影响

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1、中文摘要化瘀通络中药对肝纤维化大鼠的治疗作用及其对血小板衍生生长因子(PDGF)及Ras信号传导通路的影响摘要目的：肝纤维化(Hepaticfibrosis，HF)是各种慢性肝病发展为肝硬化的一个动态过程及共同病理途径，是肝脏纤维结缔组织过度沉积的结果。肝纤维化是机体对慢性损伤的主动性修复反应，以肝脏细胞外基质(Extra．cellularmatrix，ECM)I拘增生与沉积为特征，形态上表现为肝窦毛细血管化与肝小叶内纤维化，功能上可引起肝功能减退、门静脉高压等，甚至发展成为肝癌，严重影响患者的生命健康

2、。因此，及时治疗阻断肝纤维化的进一步发展意义重大。很多细胞因子参与了肝纤维化的发生发展，血小板衍生生长因子(Plateletderivativegrowthfactor，PDGF)是已知的最强的促肝星状细胞(Hepaticstellatecell，HSC)增殖分化的细胞因子，它能够强烈刺激HSC的增殖、迁移，转化为肌成纤维细胞，促使胶原产生、沉积，在肝纤维化的发生发展中意义重大。国内外学者对肝纤维化的发病机制进行了大量研究，但临床上阻断肝纤维化仍是一个难题，近年来开展的中医药抗肝纤维化的临床和基础研究显

3、示了一定的优势和较大的潜力。化瘀通络中药鳖甲煎丸出自张仲景《金匾要略》，具有化瘀通络、。软坚散结之功效，攻补兼施，作用全面。大量实验证实，鳖甲煎丸应对肝纤维化的复杂病机可通过多途径、多靶点的发挥中医药抗肝纤维化的作用。本研究通过对SD大鼠采用皮下注射四氯化碳(CCL4)的方法建立肝纤维化大鼠模型，应用化瘀通络中成药鳖甲煎丸对该模型进行干预，通过观察实验动物的一般情况，检测血清层粘连蛋白(LN)、IV型胶原(C01．IV)，血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、血清白蛋白(

4、ALB)的含量，观察肝脏病理学形态，检测肝组织PDGF水平，肝组织Ras、细胞外信号调节激酶(Extracellularsignalregulatedkinase，ERKl)水平，探讨化瘀通络中药对肝纤维化的防治作用及其可能作用机制，为临床上治疗以“气阴两虚、瘀血阻络’’为基本病因病机的“瘾积’’提供实验依据。方法：清洁级健康雄性SD大鼠48只，体重280．3209，适应性饲养一周后按体重随机分为正常对照组(Contr01)、模型组(Model)、西药组(The中文摘要westernmedicinegr

5、oup，简称XY)、化瘀通络中药低剂量组(Lowdosetreated)简称ZY(L)、中剂量组(Middledosetreated)简称ZY(M)、高剂量组(Highdosetreated)简称ZY(G)。除正常组外，模型组、中药各组、西药组均于实验第1天每只大鼠皮下注射40％CCl4花生"油5ml／kg，此后每3天注射3ml／kg，同时从实验第一天起，中药各组分别给予化瘀通络中药低、中、高剂量组大鼠鳖甲煎丸0．55g／(kg．d)、1．1g／(蝇．d)、2．2g／(kg．d)灌胃，西药组给予秋水仙碱

6、O．3mg&g灌胃，每日一次。从实验第四周末开始，每周末随机处死模型组大鼠，光镜下观察肝脏病理学改变，实验第6周造模成功。造模成功后给予中药各组大鼠及西药组大鼠继续灌胃5周，每日一次。从实验第一天开始，模型组大鼠给予蒸馏水灌胃，共11周。整个实验中，正常组大鼠皮下注射等量花生油，并给予蒸馏水灌胃，每日1次，共6周，6周停止皮下注射花生油，继续给予蒸馏水灌胃5周。于实验第11周末，禁食12d,时，水合氯醛麻醉，股动脉放血，分离血清，测定血清ALT、AST、ALP、ALB水平；放射免疫法检测血清LN、C01

7、．IV水平；摘取大鼠肝脏，留取肝组织，置于4％多聚甲醛固定液中，应用HE染色及Masson染色观察各组大鼠的肝脏病理形态学变化；留取肝组织于液氮速冻后置于．800C低温冰箱内保存，反转录聚合酶联反应(reversetranscription．polymerasechainreactionRT-PCR)法检测肝组织中PDGF含量、Ras蛋白水平；免疫组化方法检测肝组织中ERKl的表达。结果：1各组大鼠的一般情况在实验过程中，正常组除外，其余各组均有死亡情况：模型组死亡3只，中药高剂量组死亡1只，中药低、中

8、剂量组各死亡2只，西药组死亡3只。正常组大鼠体重呈进行性增长，饮食正常，反应敏捷，眼光有神，毛发有光泽。其余各组大鼠一般状况较差，反应迟钝，皮毛松弛，毛色暗淡，潮湿成缕，其中模型组个别大鼠出现双目失明，且脾气急躁易怒，易激惹，形体消瘦。2各组大鼠肝脏病理形态学改变正常组大鼠肝脏形态正常，包膜完整，色淡红，切面光滑整齐。肝小叶结构清晰，肝细胞多为单核，肝板呈条索状，肝细胞围绕中央静脉呈放射状排列。模型组大鼠，肝脏形态异常，表面毛糙、质脆，切面