电压门控钾离子通道kv1.3与人骨肉瘤mg63细胞关系的研究

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1、厦门大学学位论文原创性声明本人呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立完成的研究成果。本人在论文写作中参考其他个人或集体已经发表的研究成果，均在文中以适当方式明确标明，并符合法律规范和《厦门大学研究生学术活动规范(试行)》。另外，该学位论文为(中国人民解放军南京军区科技创新基金(NO：10MA077))课题(组)的研究成果，获得(中国人民解放军南京军区科技创新基金)课题(组)经费或实验室的资助，在(厦门大学抗癌研究中心)实验室完成。(请在以上括号内填写课题或课题组负责人或实验室名称，未有此项声明内容的，可以不作特别声明。)声明人。㈣：荡泉纱l弓年毛只历BJ夏f]大学学位论文著恻吏用士明l删

2、㈣本人同意厦门大学根据《中华人民共和国学位条例暂行实施办法》等规定保留和使用此学位论文，并向主管部门或其指定机构送交学位论文(包括纸质版和电子版)，允许学位论文进入厦门大学图书馆及其数据库被查阅、借阅。本人同意厦门大学将学位论文加入全国博士、硕士学位论文共建单位数据库进行检索，将学位论文的标题和摘要汇编出版，采用影印、缩印或者其它方式合理复制学位论文。本学位论文属于：()1．经厦门大学保密委员会审查核定的保密学位论文，于年月日解密，解密后适用上述授权。(√)2．不保密，适用上述授权。(请在以上相应括号内打‘‘√’’或填上相应内容。保密学位论文应是已经厦门大学保密委员会审定过的学位论文，未

3、经厦门大学保密委员会审定的学位论文均为公开学位论文。此声明栏不填写的，默认为公开学位论文，均适用上述授权。)声⋯㈣：自泉矽防6璐日摘要目的：观察和研究电压门控钾离子通道Kvl．3特异性阻滞剂rMargatoxin(MgTX)和海葵毒素(Stichodactylahelianthustoxin，SHK)对入骨肉瘤MG63细胞增殖、凋亡、细胞分裂周期、细胞迁移和侵袭能力的影响，并初步探讨其分子作用机制。方法：体外细胞培养法培养人骨肉瘤MG63细胞株，分别用特异性Kvl．3钾离子通道阻滞剂rMargatoxin和海葵毒素(SHK)阻滞骨肉瘤MG63细胞的Kvl．3钾离子通道，采用MTT法检测不

4、同浓度rMargatoxin和SHK对细胞增殖的影响；流式细胞术(FCM)检测其对细胞凋亡和细胞周期的影响：划痕实验检测其对MG63细胞迁移能力的影响；Transwell侵袭小室法检测其对MG63细胞迁移和侵袭能力的影响；通过RT—PCR和Westernblot印迹法检测其对MG63细胞中相关的基因表达和蛋白合成的影响。结果：阻滞Kvl．3钾离子通道能有效抑制人骨肉瘤MG63细胞的增殖，诱导MG63细胞发生凋亡，使细胞周期阻滞于Go／Gl期，且呈剂量依赖效应。不同浓度rMargatoxin和SHK处理MG63细胞后，可明显降低MG63细胞的迁移和侵袭能力。rMargatoxin和SHK阻

5、滞Kvl．3钾离子通道能有效下调MG63细胞中Kvl。3钾离子基因的表达水平。结论：阻滞Kvl．3钾离子通道能够抑制人骨肉瘤MG63细胞增殖和转移、调节细胞周期促进细胞凋亡，降低MG63细胞的侵袭和迁移能力。其分子机制可能与下调相关的基因的表达、从而影响相关蛋白的合成有关，说明Kvl．3钾离子通道可能成为骨肉瘤诊断治疗的新靶点和新的研究方向。关键词：Kvl．3阻滞骨肉瘤、MG63细胞增殖、凋亡、周期、侵袭、转移AbstractObjective：Manyevidenceshaveshownthatvoltage-gatedpotassiumchannelsKv1．3playsanimpo

6、rtantroleinthegrowthanddevelopmentoftumor．However'theparticipationofKvl．3inhumanosterosarcomahasnotbeenwelldocumented．Inourstudy,weexploredtheeffectsofKv1．3blockersontheproliferation，apoptosis，cellcycle，migrationandinvasioninhumanosterosarcomaMG63cells．WealsoexploredtheeffectsofKv1．3blockersonthe

7、expressionofKv1．3inhumanosterosarcomaMG63cells．Methods：SpecificKv1．3blockersrMargatoxin(MgTX)andSHKwereusedtoexaminethefunctionalroleofKv1．3intheproliferation，apoptosisandcellcycleregulationbymeansofMTTandflowcytometry