浅低温联合igf-1对大鼠全脑缺血再灌注损伤pi3kakt信号通路的影响

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1、目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文浅低温联合IGF．1对大鼠全脑缺血再灌注损伤P13K／Akt信号通路的影响前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．8日IJ吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．8材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．9结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．21宝[4木⋯⋯．⋯．⋯．⋯⋯．⋯．⋯．⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯．⋯．．⋯．⋯⋯．z：l附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．23附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．36讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．38结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．43参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．44综述以Akt为靶点治疗脑缺血性损伤⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．47致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．58个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．59中文摘要浅低温联合IGF．1对大鼠全脑缺血再灌注损伤P13K／Akt信号通

3、路的影响摘要目的：应用改良的四血管阻断法制作大鼠全脑缺血再灌注模型：通过用鼻咽腔降温对全脑缺血再灌注大鼠进行头部浅低温，并联合尾静脉注射胰岛素样生长因子．1(IGF．1)，来观察全脑缺血15min再灌注8h后海马CAl区神经元变化情况，以及分析海马神经元pAkt(磷酸化Akt)，pFox03a(磷酸化Fox03a)，Bcl一2，Bax蛋白表达情况。深入探讨P13K／Akt信号通路在低温和IGF．1对脑缺血再灌注损伤影响中作用，为以后临床预防和治疗缺血性脑损伤提供新的提供依据。方法：1实验分组与动物模型河北医科大学实验动物中心提供的健康雄性SD大鼠

4、60只，鼠龄3~4月，体重250—2809，动物合格证1303097，随机分为5组，每组12只：假手术组(S组)，缺血组(C组)，低温缺血组(H组)，缺血+IGF．1组(I组)，低温缺血+IGF．1组(m组)。应用改良Pulsinelli四血管阻断法制备大鼠全脑缺血再灌注模型．大鼠禁食8小时后称重，予腹腔注射10％水合氯醛(3ml／kg)，俯卧位固定于实验台上，剪毛并消毒后，在颈后正中第一、二颈椎处切开皮肤，分离肌层并暴露双侧翼状孔，用自制的电烧器尖端插入此孔中，烧灼下面通过的椎动脉使其闭塞，最后逐层缝合。24h以后再次麻醉大鼠，用16G套管针进

5、行气管插管，保留自主呼吸并吸入氧气及O．5％．1％的七氟醚维持麻醉。尾静脉穿刺置入24G套管针后持续泵入lml／h乳酸钠林格氏液。颈前剪毛并消毒后正中切开皮肤，分离出双侧颈总动脉，用3-0丝线穿过备用。监测大鼠脑电图，心电图，直肠温度和海马温度(海马定位是前囟后3．6ram、中线右侧旁3mm及皮层下2mm)。在大鼠躯干下放置暖水袋，躯干上放置60瓦白炽灯，通过更换暖水袋和调节白炽灯的高度来使直肠温维持在37．0土0．5℃。按照实验分组给予不同处理：假手术组(S组)只暴露双侧翼小孔和中文摘要分离颈总动脉，不灼烧椎动脉和结扎双侧颈总动脉。C、H、I、

6、Ⅻ组灼烧双侧椎动脉和夹闭双侧颈总动脉制成大鼠全脑缺血模型。其中低温组(H组和m组)：在气管插管后夹闭颈总动脉以前，在咽喉下置入吸痰管和棉球以防止误吸，然后经双侧鼻腔置入不带针芯的20G套管针，深度为1cm，持续泵注4_5。C生理盐水，速度为100ml·min"1．kg～，使海马温度降至(33．o士O．5)℃后(约15min)，夹闭双侧颈总动脉15rain，低温维持1h后自然复温。给药组(I组和m组)在再灌组后1h经尾静脉缓慢推注IGF．15嵋(用生理盐水稀释到lml)，其余组注入等量生理盐水。2标本采集和检测方法2．1标本采集假手术组观察8h，其

7、他组再灌组后8h，每组取6只大鼠，麻醉后快速灌注4％多聚甲醛溶液固定，然后断头取出大脑，置入4％多聚甲醛溶液中固定，4。C冰箱中保存备用。每组的另6只大鼠在麻醉后，快速断头打开颅骨取出大脑，快速轻轻分离出海马，迅速放入液氮中，1h后取出后放入．80℃冰箱保存。2．2HE染色光镜观察海马神经元变化情况2．3观察免疫组化法测定海马CAl区pAkt、pFox03a、Bcl．2和BaX蛋白表达情况2．4Westernblot检测海马pAkt和总Akt蛋白表达情况结果：1HE染色大鼠海马CAl区神经元的变化S组海马CAl区神经元形态结构正常，细胞排列整齐，

8、均匀分布，细胞呈边形，椭圆形，细胞边界清晰，胞浆呈淡红色，胞核呈蓝色，核大而圆，核仁明显，未见明显异常细胞。C组正常细胞减少，大量细胞排