核肌球蛋白在nox2介导的心肌缺血性损伤中的作用及机制

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1、万方数据中图分类号R967UDC601博士学位论文学校代码!Q量曼曼密级公珏核肌球蛋白在Nox2介导的心肌缺血性损伤中的作用及机制Roleofnuclearyosin。Nox2mediatedcardiacUclearmyoslnino-medlaK0leOI●l●1·l1’●■lSCllemIalnlUIYanntlleUnnerlyingmecnaniSmS作者姓名：学科专业：研究方向：张一帅药理学．心血管药理学学院(系、所)：药学院指导教师：李元建教授答辩委员会主席中南大学2013年10月万方数据学位论文原创性声明

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3、UlIIIIIIIllllIIIIIllIIIIY2686928本

4、人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：煎二!!丛日期：旦年旦月立日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅：学校可以将本学

5、位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：迭二』壁日期：旦年旦月卫日导师签名』塑万方数据第一章Nox2／VPOI途径在心肌缺血／再灌注氧化损伤中的作用及机制摘要研究背景心肌缺血／再灌注(ischemia／reperfusion，IR)损伤是缺血心肌恢复血液灌流后损伤进一步加剧的现象。心肌IR损伤涉及多种机制，氧化应激是其中之一。氧化应激损伤由活性氧(reactiveoxidativespecies，ROS)过量所致。缺血心肌中ROS主要来源于NADPH氧化酶(NADPHoxidase，Nox)。心肌

6、细胞主要表达Nox2和Nox4两种亚型，Nox可以催化氧分子得电子生成超氧阴离子。超氧阴离子极不稳定，介导氧化损伤作用有限，而且很快转化为H202，H202在过氧化物酶催化下生成氧化活性更强的HOCl，引起心肌细胞损伤(包括细胞凋亡)。血管过氧化物酶(vascularperoxid嬲e，VPO)为新发现的过氧化物酶家族成员，能催化n202生成氧化活性更强的HOCI，心脏中主要表达VP01。我们推测Nox2和VP01可能以H202为中介形成Nox／VP01途径参与介导IR氧化应激损伤。为此，我们采用了大鼠IR和心肌细胞缺氧／复氧(hypoxia／reoxygenation，HR)模型探讨该途

7、径在IR损伤中的作用及机制，该研究将丰富心肌IR损伤的氧化应激学说，也为抗心肌IR的治疗和新药的开发提供新思路。方法II万方数据蝗±堂僮诠窒圭塞摘要我们首先采用大鼠心肌IR模型，结合Nox抑制剂(印ocynin、DPI)探讨了Nox2在心肌IR中的作用以及Nox2与VP01的相关性。然后，利用H9c2心肌细胞HR模型，结合药物干预和基因沉默技术，进一步确定了Nox／VP01途径在承中的作用和机制。TTC法检测大鼠心肌梗死面积；比色法检测血浆CK活性、caspase一3、Nox活性和H202水平；心脏HE染色检查心肌病理结构的改变；TUNEL、hochest染色法检测心肌细胞凋亡；免疫组织化

8、学法检测心肌caspase．3表达；免疫荧光双标定位Nox2、VPO1的表达；realtimePCR检测心肌Nox2、Nox4、VP01mRNA表达水平；Westemblot检测Nox2、VP01、p-JNK、p-p38蛋白表达水平；荧光探针法检测心肌细胞HOCl水平。结果IR导致心肌梗死面积增大、血清CK活性升高、心肌细胞凋亡增加，apocynin或DPI干预均能抑制心肌IR损伤；IR能上调心肌Nox2、VP01表达，升高Nox活性和血浆H202水平，Nox4表达无明显变化，apocynin或DPI干预均能抑制VPO1表达、Nox活性和血浆1-1202水平升高，DPI还能抑制Nox2表达

9、上调，但apocynin无此作用；apocynin干预、Nox2或VP01基因沉默或二者共沉默均能抑制心肌细胞HR损伤；HR能上调心肌细胞Nox2、VP01表达，升高Nox活性、HOCl和I-1202水平，apocynin干预、Nox2或VP01基因沉默或二者共沉默均能抑制VP01表达增加和HOCl水平升高，Nox2基因沉默和Nox2、VP01双基因沉默均能明显抑制心肌细胞Nox2表达、Nox活性和H202III万方数据