鱼肠道弧菌单克隆抗体的制备及应用

《鱼肠道弧菌单克隆抗体的制备及应用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、万方数据PreparationandapplitionofmonoclonalantibodyagainstVzbr／o／cktk3,oenger／Thesisubmittedt01laeSlSSUbmattedtoQingdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDeg嗍ofMasterofAgronomyLiu丑m(InstituteofMarinescienceandenvironmentaleugiueeriug)Supervisor：Prof．

2、WangWenqiQingdao．ChinaJune，2013万方数据独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：叫砂时间：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，

3、允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：时间：年月日导师签名：了&√珐时间：年月日万方数据青岛农业大学硕士学位论文摘要鱼肠道弧茵单克隆抗体的制备及应用摘要利用鱼肠道弧菌作为病原菌免疫新西兰大白兔，获得免疫抗血清，建立了间接免疫荧光抗体技术(indirectimmunofluoresccnceassaytest，]FAT)和Western-blotting免疫印迹技术。免疫荧光阳性结果显示可观察到呈绿色荧光的

4、菌体，该菌体两端钝圆，弧形短杆状与鱼肠道弧菌菌体形态相一致，而阴性对照组无荧光信号显示。用鱼肠道弧菌抗血清进行Western．blotting免疫印迹，结果表明共有10条蛋白带发生了免疫反应，分子量分别为102．94KDa、88．243KDa、79．262KDa、72．731KDa、61．835KDa、36．538KDa、34．571KDa、29．571KDa和18．136KDa条蛋白带。其中88．243KDa、79．262KDa、72．731KDa、61．835KDa、42．692KDa和18．136KD共6条蛋白带较为清晰，显

5、示出较强的特异性免疫反应，而阴性对照组无任何条带显示【98】。从而为鱼肠道弧菌的检测提供了一种可行、快速的检测方法。以鱼肠道弧茵(纥brioichthyoenteri)为抗原，制备抗鱼肠道弧菌多克隆抗体，进而建立了此茵的间接酶联免疫吸附检测技术(EnzymeLinked／mmunosorbentAssay，ELISA)。该方法最佳反应条件为：抗原包被浓度为为107cfu／mL，免疫血清稀释度为1：211。病原菌检测灵敏度为每孔105cfu／mL。抗血清与迟钝爱德华氏菌、杀鲑气单胞菌、弧菌等8种水产致病菌的交叉反应结果呈阴性。用该法

6、检测人工感染后的牙鲆和健康牙鲆，在发病鱼的肝、肾、脾、腹水等处检测出病原菌而健康鱼则为阴性，准确率为95％。说明该技术能够准确、快速检测出鱼肠道弧菌。以鱼肠道弧菌为抗原免疫小鼠，采用PEG方法进行细胞融合，间接免疫荧光抗体技术和酶联免疫吸附检测技术两种方法筛选确认阳性杂交瘤细胞株，取两种方法检测均为阳性的细胞株进行亚克隆，获得分泌抗鱼肠道弧菌抗体的单克隆细胞株(1C6、1D8、2D7、2D10、2E3)，免疫印迹(Westernblotting)结果显示单抗2D10与分子量为44．2KDa，36．7KDa的鱼肠道弧菌蛋白发生特异性

7、结合；流式细胞技术(FlowCytometry，FCM)结果显示阳性荧光比例为13．63％，阴性对照荧光比例不足1％。关键词：鱼肠道弧菌；间接免疫荧光抗体技术；免疫印迹技术；间接ELISA技术；单克隆抗体；万方数据青岛农业大学硕士学位论文AbstractPreparationandprimaryapplaionofmonoclonalantibodyagahlst黝励嘲嘶删AbmctIndirectimmunofluoresccmceassaytest(IFAT)andWestern-blottingforrapiddiagnos

8、isofVibrioicM]矽oenterihavebeendeveloped．AntiserumspecificfortheFibrioichthyoenteriWaSproducedfromNewZealandwhiterabbitanduse