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《2007 盐胁迫下西伯利亚蓼蛋白质双向电泳分析及质谱鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、第23卷哈尔滨师范大学自然科学学报Vol.23,No.22007第2期NATURALSCIENCESJOURNALOFHARBINNORMALUNIVERSITY盐胁迫下西伯利亚蓼蛋白质3双向电泳分析及质谱鉴定郑磊刘关君杨传平王大海(东北林业大学)(中国林业科学研究所)【摘要】通过蛋白质双向电泳和质谱技术,对盐胁迫前后西伯利亚蓼的蛋白质组进行了比较分析.在pH3～10范围内,在西伯利亚蓼地下茎蛋白表达图谱中发现23个蛋白质点胁迫后的表达量与对照有明显差异(±2倍以上),其中包括一个新增蛋白点.对表达量变化较大的11个蛋白点进行质谱分
2、析,并通过数据库检索进行蛋白质鉴定与功能预测,确定了4种蛋白质.其中的两种蛋白甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Glyceraldehyde3-phosphatedehydrogenase)和丙酮酸正磷酸二激酶(Pyruvate,ortho2phosphatedikinase)胁迫后高表达,说明地下茎细胞内正进行着旺盛的呼吸代谢,以提供维持植物生长发育以及抵抗外界胁迫所需的能量.关键词:西伯利亚蓼;盐胁迫;双向电泳双向电泳(two-dimensionalgelelectrophore20引言sis,2-DE)是蛋白质组学研究的经典方法之一,特
3、别是对于表达蛋白质学的研究是不可缺少的手西伯利亚蓼是一种盐生植物,能在盐碱地的段.近年来2-DE技术被广泛应用于医学、农业碱斑上生长.陆静梅、杜军华等对西伯利亚蓼进行[5,6][1,2]和微生物学等研究领域.Salekdeh等对干旱胁了解剖学特征及叶肉细胞超微结构的研究,迫下以及恢复灌溉后水稻叶片蛋白质组进行分阐述了西伯利亚蓼具有耐干旱耐盐碱的解剖学特[7]析,发现干旱胁迫下有42个蛋白点的丰度有显征,是其长期适应干旱盐碱环境演化出的适应结著变化,从而鉴定了一些干旱应答蛋白.杨平仿等构.吕艳芳等对NaHCO3溶液处理后西伯利亚蓼对低
4、温胁迫下的水稻叶片蛋白质组进行了研营养器官内部无机离子含量的变化进行了研[8]究.Abbasi等利用蛋白质组学技术分析了水稻[3]究.刘关君等用SDS-PAGE研究了NaHCO3[9]叶鞘对不同盐浓度的反应.[4]处理后西伯利亚蓼不同部位蛋白表达的变化,双向电泳在植物中的应用主要集中在水稻、发现胁迫后地下茎、茎和叶部蛋白的[10]SDS-PAGE小麦等作物中,对盐胁迫下西伯利亚蓼蛋白表图谱都出现了表达量受正向调控的蛋白条带,而达变化的研究还未见报道.本实验结合IEF/SDS且这些蛋白对盐胁迫的反应存在着时空上的多样-PAGE双向电泳
5、技术与质谱分析技术,对盐胁性.迫前后西伯利亚蓼地下茎表达的差异蛋白进行定收稿日期:2006-11-133国家重大基础研究基金规划973项目(G1999016003)102哈尔滨师范大学自然科学学报2007年-1性定量的研究,以期发现一些与胁迫相关的蛋白,IPGBuffer缓冲液,用泡涨液(7mol·L尿素,-1-1进而为后续的耐盐机理研究提供依据.2mol·L硫脲,2%CHAPS,10mmol·LDTT)补足体积至250μL,20000rpm,4℃离心15min,1材料与方法进行等电聚焦电泳.等电聚焦设置参数如表1.1.1材料表1试
6、材为温室中生长一个月的西伯利亚蓼扦插步骤电压时间苗,用3%NaHCO3溶液胁迫处理5d后,分别取StepsVoltage/Vt/h未经胁迫处理的对照植株及处理后植株的地下茎泡涨01部分.取材时用自来水冲洗植株表面浮土,迅速用3011滤纸吸干表面水分,放入-70℃冰箱备用.110011.2设备与试剂23001电泳槽(HoeferSE600),电泳仪(EPS/001),35001等电聚焦电泳仪(IPGphor),扫描仪(InageScaner4100012100),lPG胶条(pH为3～10),IPGBuffer(pH358000(Gr
7、adient)0.5～10),考马斯亮蓝R250,二硫苏糖醇(DTT),四680006甲基乙二胺(TEMED),甲叉双丙烯酞胺,尿素、丙50μA/Strip,20℃烯酰胺,甘氨酸,碘代乙酰胺,CHAPS,Tris-bass,1.3.4胶条的平衡十二烷基硫酸钠(SDS)均购白AmershamBiotech等电聚焦后胶条立即进行SDS平衡,平衡分公司;硫脲购自Sigma公司;其他试剂为国产.两遍,各15min.第一次SDS平衡液(30%甘油,1.3方法-1-16mol·L尿素,2%SDS,50mmol·LTris-1.3.1用于双向凝胶
8、电泳分析的蛋白提取方法HClpH8.8,0.01%溴酚蓝)中添加1%DTT,第采用TCA-丙酮干粉法提取植物的总蛋白,二次SDS平衡液中加2.5%碘代乙酰铵.用于双向凝胶电泳分析.称取1g左右的植物材1.3.5第二向SDS-聚丙烯酰胺
