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《一株海洋发光细菌的分离鉴定及其发光条件的初步研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、海洋湖沼通报2003年TransactionsofOceanologyandLimnologyNo2-文献编号:1003-6482(2003)02-0058-06一株海洋发光细菌的分离鉴定及其发光条件的初步研究杜宗军,王祥红,李海峰,陈吉祥,李筠(中国海洋大学海洋生命学院,青岛266003)摘要:从青岛近海海洋沉积物样品中分离出一株海洋发光细菌,命名为D40。经过形态观察以及一系列生理生化特征测试结果,确定这株菌属于弧菌属(Vibrio)的哈维氏发光弧菌(Vibrioharveyi)。同时对这株菌的发光条件和发光特点进行了初步研究,实验结果表明,细
2、菌D40在PH7.5,温度30℃,NaCl浓度为3.0%时,发光强度最高,液体培养4h开始发光,6h后,发光达到峰值,持续发光时间可达19h。关键词:发光细菌;鉴定;发光条件中图分类号:Q935文献标识码:A发光细菌是一类在正常的生理条件下能够发射可见荧光的细菌,这种可见荧光波长在[1]450～490nm之间,在黑暗处肉眼可见。目前,全世界已发现和命名的发光细菌有11种,分别属于弧菌属(Vibrio)、发光杆菌属(Photobacterium)、希瓦氏菌属(Shewanella)和异短杆菌[2～3]属(Xenorhabdus)。不同种类发光细菌的发光
3、机理是相同的,是由特异性的荧光酶(LE)、还原性的黄素(FMNH2)、八碳以上长链脂肪醛(RCHO)、氧分子(O2)所参与的复杂反应。[4～5]发光细菌由于其独特的生理特性,在环境监测中被作为测定环境中毒物的指标。发光细菌与外来受试物接触后,由于毒物具有抑光作用,发光细菌的发光强度即有所改变,变化的程度与受试物的毒性大小呈相关关系。发光强度的变化可以用发光光度计测出。用发光细菌来检测有毒物质,由于有毒物质仅干扰发光细菌的发光系统,费时较少且敏感性较好,操作简便,结果准确,在国内外越来越受到重视。发光细菌由于其独特的生理特性,与现代光电检测手段完美匹配
4、的特点而备受关注,在环境监测中的应用也越来越广泛。本文从来自胶州湾海洋沉积物中分离得到一株海洋发光细菌并进行鉴定,对这一株菌的发光条件和发光特点进行了初步研究。1材料和方法[2,6]1.1培养基1.1.1海水2216E液体培养基蛋白胨5g,酵母粉1g,磷酸铁0.1g,海水1000mL,pH7.6。第一作者简介:杜宗军,男,1974年出生,硕士,讲师,从事海洋生物学及微生物酶学研究。收稿日期:2002-09-202期一株海洋发光细菌的分离鉴定及其发光条件的初步研究591.1.2海水2216E固体培养基在以上液体培养基中加入2%的琼脂即可。1.1.3发
5、光固体培养基牛肉膏10g,蛋白胨20g,甘油10g,NaCl30g,琼脂20g,蒸馏水1000mL,pH6.9,调pH后加CaCO35g。1.1.4发光液体培养基酵母膏5g,胰蛋白胨5g,NaCl30g,Na2HPO45g,KH2PO41g,甘油3mL。以上培养基配好后,121℃灭菌20min备用。1.1.5TCBS培养基TCBS琼脂89.1g溶于1升蒸馏水中,加入20gNaCl,加热煮沸至完全溶解,冷却至55℃备用。1.2实验方法1.2.1发光细菌的分离-3-4-5将采自胶州湾海底的泥样用无菌海水稀释为10,10,10三个浓度,用涂布棒均匀涂布于海
6、水2216E培养基上,28℃恒温培养48h,进行暗室观察,挑取发出荧光的菌落。1.2.2发光细菌的鉴定[7～8]对分离得到的发光细菌进行形态和生理生化特征测定,测定方法按照有关文献进行。[3]测定后,根据伯杰氏手册进行鉴定。1.2.3发光条件的研究1.2.3.1NaCl浓度对细菌发光的影响:以含不同浓度NaCl的蒸馏水代替海水,其它成分与海水2216E液体培养基的成分相同,配制NaCl浓度分别在0%,0.5%,1%,1.5%,2%,2.5%,3%,5%,7.5%和10%的培养基,接种发光细菌,培养24h后观察生长和发光情况。1.2.3.2pH值对细菌
7、发光的影响:配制pH分别在5.0,5.5,6.0,6.5,7.0,7.5,8.0和8.5的海水2216E液体培养基,接种发光细菌,培养24h后观察生长和发光情况。1.2.3.3研究培养温度对细菌发光的影响:发光细菌接种于2216E固体培养基,分别在4℃,20℃,25℃,30℃,35℃,40℃和45℃条件下培养,分别在24h和48h观察生长和发光情况。1.2.3.4研究液体培养时培养时间对细菌发光的影响:发光细菌接种于发光液体培养基,28℃恒温水浴培养3h,4h,5h,6h,7h,8h,9h,10h,11h,12h,16h,20h和24h后观察发光情况
8、。1.2.3.5研究不同培养基对发光细菌生长和发光的影响:将发光细菌分别接种于2216E固体、液体培养基,发
