资源描述：
《一株抗真菌解淀粉芽孢杆菌的分离鉴定及其发酵条件的初步研究_权春善》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、一株抗真菌解淀粉芽孢杆菌的分离鉴定及其发酵条件的初步研究_权春善46卷 1期2006年2月4日微生物学报ActaMicrobiologicaSinica46(1):7～124February2006一株抗真菌解淀粉芽孢杆菌的分离鉴定及其发酵条件的初步研究权春善,王军华,徐洪涛,范圣第12211(大连民族学院生命科学学院生物工程研究中心 大连 116600)2(大连理工大学环境与生命学院生物科学与工程系 大连 116024)摘 要:从堆肥中分离到一株对植物病原菌尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)具有
2、强烈抗菌活性并具有较广抗菌谱的细菌Q-12菌株。通过形态观察、生理生化实验、16SrDNA同源性序列分析以及部分特异性基因序列分析,鉴定该菌为解淀粉芽孢杆菌。该菌的最适培养基组成为:葡萄糖5gL,NH4Cl1gL,牛肉膏0.8gL,氯化镁5gL。最适培养温度为33℃,最适培养pH为6.0,最适培养时间为40h。关键—————————————————————————————————————————————————————词:解淀粉芽孢杆菌;枯草芽孢杆菌;鉴定;抑菌活性中图分类号:Q93 文献标识码:A 文章编
3、号:0001-6209(2006)01-0007-06 据联合国粮农组织(FAO)统计,每年因遭受植物病害引起的减产平均损失为总产量的10%～15%,其中80%以上的植物病害是由真菌引起的。目前真菌防治主要以化学农药为主,而化学农药引起的环境污染已经对人类健康造成潜在的威胁。并且大多数引起植物病害的病原菌寄生于土壤中,一般化学农药难以从根本上控制其危害,亟待有新的、高效的微生物农药新品种或新剂型投放市场,以满足该领域的需求。堆肥中含有大量的植物病原菌拮抗菌,而且这些菌适应环境的能力较强,因而从中寻找可用作生物
4、农药或者生物肥料的菌种成为可能。本文从堆肥中分离到一株对尖孢镰刀菌具有强烈抗性的菌株,经鉴定该菌为解淀粉芽孢杆菌。该菌株营养要求较简单,环境适应能力强,有望用作生物农药或生物肥料,具有很高的开发应用前景。[3][2][1]养基(PDA),其组成为:每升含马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂15g,pH自然。Q-12菌的基础培养基为BPY培养基,其组成为:每升含葡萄糖5g,蛋白胨1g,牛肉膏5g,酵母粉5g,氯化钠5g,pH7.0。1.1.3 主要试剂和仪器:DNA凝胶回收纯化试剂盒(Ver2.0)、PCR————
5、—————————————————————————————————————————————————反应用的各种试剂均购自大连TaKaRa公司;DNA提取用试剂盒购自BIO-RAD;API试剂盒(50CHB20E)和API培养基(50CHBE)购自bioMérieux;蛋白胨、牛肉膏、NaCl、葡萄糖、阿拉伯糖等购自上海生物工程技术服务有限公司。光学显微镜(OLYMPUSBH-2)。1.2 菌种的分离纯化从大连地区收集了200份堆肥样品,分别称取0.5g样品悬浮在4.5mL生理盐水中,剧烈振荡。将20mLPDA培
6、养基均匀地注入一个直径为9cm的平皿中,待培养基凝固,在其正中间放置一片圆形滤纸片(Paperdisk),然后把20μL上述土壤样品悬浮液滴入圆形滤纸片中。接着在距平皿中心2.5cm处对称地接上病原菌,将平板置于28℃培养3～7d并观察抑菌圈的形成。挑选出有明显抑菌圈的平板,将生长在圆形滤纸片周围的菌落用划线法接种到营养琼脂平板上。纯菌通过反复划线接种并培养单菌落而获得。1.3 菌的鉴定1.3.1 形态观察与染色:在光学显微镜下观察个体形态并测量菌体大小;参照文献[4]进行Gram染色、芽孢染色。1 材料和方法
7、1.1 材料1.1.1 菌种:Q-12菌株在本研究中筛选分离得到。用于筛选实验的植物病原菌尖孢镰刀菌1(Fusariumoxysporumf.sp.spinaciaeO-27),尖孢镰刀菌2(F.oxysporumf.sp.Ladicis-lycopersiciO-34),立枯丝核菌(RhizoctoniasolanikǜhnO-28)由日本广岛大学生物生产学部太田钦幸教授惠赠。用于测定抑菌谱的其它菌种由广岛大学工学部菌种保藏中——————————————————————————————————————————
8、———————————心提供。1.1.2 培养基:分离筛选用培养基为马铃薯固体培基金项目:辽宁省自然科学基金项目(2040949)作者简介:权春善(1973-),女,黑龙江人,副教授,主要从事微生物学及分子生物学的研究。Tel:86-411-87532756;Fax:86-411-87644496;E-mail:mikyeken@dlnu.edu.cn收稿日期:2005_05_25;接
