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《一株蜡状芽孢杆菌α-淀粉酶产生菌株的分离鉴定及酶学性质研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、2010NO.8·68·SerialNo.221ChinaBrewingResearchRepo~一株蜡状芽孢杆菌.淀粉酶产生菌株的分离鉴定及酶学性质研究刘洋,陈爱萍,朱小顺,鲁水龙,刘玉东,王龙,刘莉(湖州师范学院生命科学学院,浙江湖州313000)摘要:从土壤中筛选出一株淀粉酶分泌能力较强的菌株,通过形态学观察、生理生化试验、16srDNA测序分析等方法对该菌株进行了鉴定,并对其分泌的淀粉酶的酶学性质进行了研究。经鉴定该菌株为蜡状芽孢杆菌。酶学性质研究表明,该酶的最适温度为40℃,最适pH值为5.0~6.0,在40℃
2、保温20min,酶活力下降70%左右。ca酶的活性和热稳定性没有激活作用。非变性蛋白电泳和淀粉酶活性染色结果显示,该菌仪产生一种淀粉酶。通过高效液相色谱分析,该酶对可溶性淀粉的主要水解产物为糊精、寡聚糖和少量葡萄糖,表明该酶为0【一淀粉酶。关键词:蜡状芽孢杆菌;分离鉴定;一淀粉酶;酶学性质中图分类号:Q93—331文献标识码:A文章编号:0254—5071(2010)08—0068—04Isolationandidentificationofan0t.amylase-producingBacilusoefeu$strai
3、nandenzymaticcharacteristesofthe.amylaseLIUYang,CHENAiping,ZHUXiaoshun,LUShuilong,LIUYudong,WANGLong,LIULi(SchoolofLifeScience,HuzhouNormalInstitute,Huzhou313000,China)Abstract:Astrain,whichproduced仅一amylaseathighlevel,wasisolatedfromsoilandidentifiedasBacillusce
4、Feusbymorphological,physiologicalandbiochemicalcharacteristicsand16SrDNAanalysis.Theenzymaticpropertiesoftheamylasesecretedbythestrainwerestudied.TheoptimumtemperatureandpHwere400(2and5.0-6.0.respectively.Theactivityofamylasedecreasedabout70%whenitwastreatedat40℃
5、for20min.TheCa斗showednosignificantefectsonenzymeactivityandthermo—stability.AccordingtotheelectrophoretogramofnativePAGEandactivestaining.onlyoneamylasewasproducedbyBacilluscereus.WiththeanalysisofHighPerformanceLiquidChromatography(HPLC),themainhydrolysatesofsol
6、ublestarchtreatedbytheamylaseweredex~n,oligosaccharidesandasmallquantityofglucose,whichindicatedthattheamylasewas—amylase.Keywords:Bacilluscereus;isolationandidentification;—amylase;enzymaticproperties淀粉酶(Amylase)是能水解淀粉转化成葡萄糖、麦芽1.1.1土壤样品糖及一些低聚糖的一类酶类的总称,广泛应用于酿酒、食采
7、集自浙江中味酿造公司排污管附近。品、医药、纺织、饲料等领域。淀粉酶按对淀粉水解方式不1.1.2主要试剂和仪器同可分为0【淀粉酶、B.淀粉酶、葡萄糖淀粉酶和异淀粉酶4丙烯酰胺:过硫酸铵购自Sigma公司;Taq酶:购自类[1]。由于其具有重要的商业价值,人们一直在积极寻找能TaKaRa公司;PCR纯化试剂盒:购自axygen(爱思进)公产生该酶的新菌株或选育该酶的高产菌株。有数百种嗜司;其他试剂均为国产分析纯。PCR仪:购自德1~Eppen.热真菌和上千种细菌可以产生淀粉酶,仅芽孢杆菌属就有d0州投份公司;紫外分光光度计:
8、购自Beckman公司;恒温48个种能产生淀粉酶[3J。摇床:购自美国Therrno公司。引物:由上海英俊生物技术近年来虽然我国酶制剂工业蓬勃发展,但与国外相比,有限公司合成。我国还存在着淀粉酶剂型、品种和生产菌株太过单一等1.1.3培养基问题。筛选出能产生特定酶学性质的淀粉酶菌株具有重淀粉培养基和LB培养基【4】。
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