几株产活性物质的海洋细菌的分离与初步鉴定.pdf

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1、氨基酸和生物资源AminoAcidS&BioticreSourceS2001，23（1）：5!8·5·几株产活性物质的海洋细菌的分离与初步鉴定!孙昌魁，刘清海，马桂荣（山东大学生命科学学院微生物技术国家重点实验室，济南250100）摘要：从海泥、海水及海洋动物中分离到数十株细菌，对其产生活性物质的菌株进一步筛选，得到产蛋白酶、淀粉酶和抑菌活性等生物活性物质的几株海洋细菌，将其中的活性高的四株菌纯化后进行菌种鉴定。通过对革兰氏染色、个体及群体形态观察、糖类发酵、硝酸盐还原等生理特性的研究，依据《伯

2、杰氏细菌鉴定手册》确定它们的分类地位，它们分别应归属为欧文氏菌属（ErwiniaSp.）、气单孢菌属（AeromonasSp.）、微球菌属（（MicrococousSp.）、和假单孢菌属（（PseudomonasSp.）。关键词：海洋细菌；生物活性物质；分离鉴定中图分类号：G939.1文献标识码：A文章编号：1006-8376（2001）01-0005-04由于海洋环境十分独特，包括了高压、低营株。养、低温（特别是深海）、无光照以及局部的高1.2菌种筛选温、高盐等所谓的生命极限环境。因此生存在1

3、.2.1具有蛋白酶活性菌株的筛选：用滤纸片这样极端环境下的微生物与陆地土壤微生物相法测定。在干酪素平板上无菌放置的滤纸片上比较，它们很可能具有一些不相同的代谢途径滴一滴待鉴定菌悬液，在30C培养24!361和遗传背景。显然这将是生产新型医药品的一后滴加三氯乙酸观察结果。个潜在的微生物资源［1］。而且海洋细菌所产1.2.2具有水解淀粉活性菌株的筛选：用滤纸的生物活性物质又往往不同于来自陆栖细菌所片法测定。在含定粉的平板上无菌放置的滤纸产生的［2，3，4］。因此，海洋微生物资源的研究与上滴一滴待鉴定

4、菌悬液，在30C培养241后开发和应用越来越受到世界各国特别是沿海国滴加碘液观察有无透明圈。家的重视［6，7］。本文报道几株产活性物质的细1.2.3具有抑菌活性菌株的筛选：以大肠杆菌菌的分离与初步鉴定。（E.coli）、金黄色葡萄球菌（S.aureus）、溶壁微球菌（M.iysodikticus）为指示菌用滤纸片1材料和方法法测待鉴定菌的抑菌活性。1.1菌种的分离1.3菌种鉴定主要依据Bergey"SManualofde-［5］1.1.1富集：将从山东渤海、黄海海域中采集的terminative

5、Bacteriology.海泥或海洋动物消化道内容物制成悬液，分别1.3.1形态观察：在光学显微镜下，用革兰氏接于用海水配制的细菌、真菌和放线菌等培养染色、鞭毛染色、芽孢染色，观察菌体形态，并测基中，在20C、25C、30C下振荡培养481。菌体大小。用扫描电子显微镜进一步确定个体1.1.2分离纯化：将富集的菌分别在相应的固形态和繁殖方式。体培养基平板上反复划线直至得到纯培养的菌1.3.2生理特性测定!收稿日期：2000-09-26作者简介：孙昌魁（1976—），男，山东大学生命科学学院硕士研究

6、生。·6·孙昌魁，等.几株产活性物质的海洋细菌的分离与初步鉴定1.3.2.1耐盐试验：将分离得到的菌株接种于蕊牛奶管中，30C培养24h、3d、5d、7d、9d0%!7.0%的氯化钠浓度梯度的牛肉膏蛋白胨后观察记录石蕊牛奶管的变化情况。液体培养基，30C培养24h，用722型分光光1.2.3.7硝酸盐还原试验：将鉴定菌接入硝酸度计测定不同盐浓度下的培养基浊度，表示生盐液体管中，30C培养24h，加格里斯氏试剂长情况，确定其对盐的耐受度和最适盐度。观察结果。1.3.2.2运动性观察：用半固体穿刺法

7、。培养1.2.3.8糖发酵试验：将鉴定菌分别穿刺接种24h观察结果。在含葡萄糖（Glucose）、果糖（Fructose）、乳糖1.3.2.3过氧化氢酶测定：取一环培养24h的（lactose）、麦芽糖（maltose）、木糖（Xylose）、甘露菌苔，涂在干净的载玻片上，滴一滴3%的双氧醇（Mannitol）培养基中，30C培养1d、2d、3d、水（H202）观察结果。4d、5d、6d、7d观察结果。1.3.2.4明胶液化试验：将待测菌穿刺接种到明胶培养基中，30C培养24h，放入冰箱待对2结

8、果与讨论照管凝固后观察结果。2.1筛选结果1.2.3.5硫化氢产生试验：用醋酸铅试纸条2.1.1产酶菌株的筛选：在干酪素平板上，产生法。鉴定菌培养24h、3d、7d后分别观察试纸明显的水解圈者表示有蛋白酶活性，在淀粉平条的颜色是否变黑。板上，产生明显的水解圈者表示有淀粉酶活性，1.2.3.6石蕊牛奶试验：将鉴定菌分别接到石结果如表1。表1产蛋白酶和淀粉酶的菌株筛选结果菌株A-214-25-237-11"#Y-1蛋白酶活性+++++++++---淀粉酶活性--+++----从表1中可见，4-2、7