一株海洋光合细菌D25的分离与鉴定.doc

《一株海洋光合细菌D25的分离与鉴定.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、一株海洋光合细菌D25的分离与鉴定　　摘要：从威海近海采得的海洋沉积物中经过富集培养和分离筛选，得到一株紫色菌落的海洋光合细菌，编号为Ｄ２５。利用梅里埃公司细菌鉴定系统对菌株的生理生化特征进行了检测，ＡＰＩ２０Ｅ检测结果共有ＡＤＨ、ＣＩＴ等４项检测项目呈阳性，ＯＮＰＧ、ＬＤＣ等１６项检测项目呈阴性。经ＰＣＲ反应得到１６ＳｒＲＮＡ基因序列，１６ＳｒＲＮＡ基因序列测定和分析结果显示该菌株为嗜硫小红卵菌。　　关键词：海洋；光合细菌；１６ＳｒＲＮＡ基因；生理生化　　中图分类号：Ｑ９３－３３１文献标识码：Ａ文章编号：0439－８11416－3276-0

2、3　　　　ＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＰｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｕｍＤ２５　　　　ＬＩＵＴｉａｎ－ｈｕａ，ＬＩＬｅ－ｌｅ，ＱＩＡＯＭｅｎｇ，ＸＩＥＦｅｉ　　　　　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＡｐｕｒｐｌｅｓｔｒａｉｎｏｆｍａｒｉｎｅｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａｎｕｍｂｅｒｅｄＤ２５ｗａｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｍａｒｉｎｅｓｅｄｉｍｅｎｔｓｏｆＷｅｉＨａｉｏｆｆｓｈｏｒｅｔｈｒｏｕｇｈｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔｃｕｌｔｕｒｅ，ｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｓｃｒｅｅｎ．Ｔｈｅｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ

3、ａｌａｎｄｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｓｔｒａｉｎＤ２５ｗｅｒｅｔｅｓｔｅｄｂｙＮｅｗＡＴＢ，ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆＡＰＩ２０Ｅｔｅｓｔｓｈｏｗｔｈａｔ４ｉｔｅｍｓｐｒｅｓｅｎｔｐｏｓｉｔｉｖｅｓｕｃｈａｓＡＤＨａｎｄＣＩＴ，１６ｉｔｅｍｓｐｒｅｓｅｎｔｎｅｇａｔｉｖｅｌｉｋｅＯＮＰＧａｎｄＬＤＣ．Ｔｈｅ１６ＳｒＲＮＡｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｗｅｒｅｃｌｏｎｅｄｂｙＰＣＲｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｔｅｓｔｉｎｇａｎｄａｎａｌｙｚｉｎｇｏｆ１６ＳｒＲＮＡｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｉｄｅｎｔｉｆie

4、dｔｈｅｓｔｒａｉｎａｓＲｈｏｄｏｖｕｌｕｍｓｕｌｆｉｄｏｐｈｉｌｕｍ．　　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｍａｒｉｎｅ；ｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａ；１６ＳｒＲＮＡｇｅｎｅ；ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　　　　光合细菌，是一类在自然界中广泛存在的，能在厌氧条件下进行不放氧的光合作用并且能够利用光能自养生长，具有复杂代谢功能的细菌的总称。其具有固碳、固氮、脱氮、氧化硫化物等功能，是生命演化中的过渡类型，可作为光合作用机理和产氢固氮机理的研究材料［１－３］。由于光合细菌可以广泛利用多种有机物，具有在不同的条件下进行多

5、种方式的生长代谢的特点，使其在有机废水处理中得以应用，和传统活性污泥法相比，利用光合细菌处理污水具有动力消耗低、脱氮除磷效果好、设备规模小、占地面积小、管理简易等明显优势［１］。此外，由于光合细菌具有净化水质和保护水环境的作用，加之其本身是活蛋白，营养丰富，在水产养殖方面可以促进生长，提高成活率和养殖效果，含有的抗病毒因子及多种免疫促进因子可活化机体的免疫系统，因此其在水产养殖方面也得到了广泛的应用［４］。对海洋沉积物中的一株光合细菌Ｄ２５进行分离并对其生理生化特性进行研究以及１６ＳｒＲＮＡ基因序列的测定和分析，经鉴定该菌株为Ｒｈｏｄｏｖｕｌ

6、ｕｍｓｐ．的Ｒｈｏｄｏｖｕｌｕｍｓｕｌｆｉｄｏｐｈｉｌｕｍ。　　１材料与方法　　１．１材料　　１．１．１海洋沉积物海洋沉积物由威海近海海域采得。　　１．１．２培养基富集培养基：氯化铵１.0ｇ，乙酸钠２.0ｇ，ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ０．２ｇ，酵母膏０．２ｇ，蛋白胨０．２ｇ，ＥＤＴＡ１.0ｇ，１０００ｍＬ陈海水，ｐＨ值为７，灭菌后加入碳酸氢钠１.0ｇ，磷酸二氢钾０．２ｇ。分离培养基：蛋白胨５.00ｇ，酵母粉１.00ｇ，柠檬酸铁０．０１ｇ，琼脂１８.00ｇ，陈海水１０００ｍＬ，pＨ值为７。　　１．２方法　　１．２．１海洋光合细菌的富集取海洋沉积物约３

7、ｇ，置于盛满富集培养基的２５０ｍＬ密闭富集培养瓶中，置于有恒定光源的恒温培养箱中在２８℃条件下富集培养３０ｄ，至培养液呈红褐色时，富集结束。　　１．２．２海洋光合细菌的分离对富集得到的培养液进行适当稀释后采用涂布法转接到分离培养基，恒温培养箱中２８℃恒温培养５ｄ。选取紫色单菌落进行进一步的分离纯化培养，得到海洋光合细菌的纯培养菌株Ｄ２５。　　１．２．３生理生化特性检测取一环分离纯化得到的纯培养菌株，通过划线的方法转接入分离培养基中２８℃恒温培养４８ｈ。利用梅里埃公司细菌鉴定系统对菌株进行生理生化特征的检测与分析。　　１．２．４１６ＳｒＲＮＡ基

8、因序列测定和分析［５－８］将菌株转接入分离培养基中于恒定光源的恒温培养箱中２８℃培养过夜。取一环单菌落悬浮于５０μＬ无菌去离子水中，１００℃水浴加热５ｍｉｎ，离心，