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《一株降解苄嘧磺隆光合细菌的分离鉴定及其降解特性》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、一株降解节囉磺隆光合细菌的分离鉴定及其降解特性张松柏仁,张德咏1,2,罗香文2、尹乐斌1,刘勇1,2*,程菊娥2、朱春辉21.中南大学研究生院隆平分院，湖南长沙410125；2.湖南省植物保护研究所，湖南长沙410125摘要：从农药厂工业废水和污泥中富集分离到一株能降解节吨磺隆(Bensulfuronmethyl)的光合细菌PSB07-6,根据分离菌株的细胞形态结构、活细胞光吸收特征、生理生化特征以及系统发育分析将该菌初步鉴定为沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris高效液相色谱法(H
2、PLC)测定该菌降解光合细菌培养基中节吨磺隆的能力，在pH为6.5的光合细菌培养基中培养5d,对350磺隆降解率达25.03%,添加回收率为105%~112%。降解特性研究结果表明，该菌能以节吨磺隆为唯一碳源和氮源，降解最佳条件为30°C、pH6.5o关键词：节嗨磺隆；光合细菌；降解特性；生物修复中图分类号：X172文献标识码：A文章编号：1672-2175(2008)05・1力4・04通过农药的使用，来提高单位面积粮食产量是21世纪农业的重要举措之一。而杂草防除在农作物生产中则起着关键性的作用。磺酰腺类除草剂
3、以其超高效性为农药的发展开辟了一个新天地，其单位面积用量极低，每公顷仅以克计，生物活性高，除草效果好，对敏感植物无药害山刀。但是磺酰腺类除草剂选择性强，对不同作物的敏感性差异很大，在其应用过程中遇到残留药害和抗性问题，许多国家和地区目前不得不暂时禁用某些此类除草剂⑶。目前，国内外对于该类化合物在环境中消减的研究，大多集中在对其化学代谢及理化影响因素方面，对于微生物降解途径及化学物的生物降解性方面尚无系统研究*%从废水和污泥中分离到一株能降解节喀磺隆的光合细菌PSB07-6,并对其降解节嗨磺隆的特性进行了初步研究
4、。该研究工作为利用光合细菌菌剂在节吨磺隆生物修复中的应用提供一定理论依据。1材料和方法1.1培养基、试剂和主要仪器光合细菌分离培养基(PSB培养基)，MM培养基，参考文献[6],选择培养基：在光合细菌分离培养基中不加碳源和氮源，加入一定质量浓度的节嗨磺隆；以上试剂均为分析纯。“=10%节嗨磺隆WP,浙江天一农化有限公司;iv=98%^«磺隆标样，天津东方绿色技术发展有限公司。节嚅磺隆残留检测由湖南省植物保护研究所农药残留检测室检测，农药残留检测试剂均为色谱纯。HPLC(Waters600,USA),JEXL-I
5、230透射电子显微镜(日本电子公司，日本)，分光光度计(Tu・1901,北京普析通用仪器有限责任公司)。1.2降解菌的筛选降解菌的筛选采用富集培养分离⑺，筛选到能耐受400mgL'1®磺隆的光合细菌，命名为PSB07-6o1.3菌株的鉴定1.3.1传统的细菌鉴定方法检测各种生理生化指标⑻。1.3.2电镜样品制备及观察将活的细菌滴到具膜载网上，然后进行磷鹄酸染色,TEM(transmission-scanningelectronmicro・scope)观察拍照。1.3.3菌体吸收光谱的测定取1.5mL培养5d的光
6、合细菌培养液，8000「min"离心洗涤3次，用vv=0.9%生理盐水重悬浮，分光光度计300-900nm扫描。1.3.4菌体16SrDNA序列的测定细菌基因组提取采用上海生工生物工程技术服务有限公司UNIQ-10柱式基因组DNA抽提试剂盒，步骤参见使用说明书。以所提的细菌总DNA为模板，细菌16SrDNA通用引物进行PCR扩增⑼，w=l%琼脂糖电泳，检测扩增片断的大小和特异性，上海生工生物工程技术服务有限公司测序。1.3.516SrDNA序列同源性比对及系统发育树构建将PSB07-6测得的16SrDNA序列在
7、GenBank中利用blast进行比对,用ClustalW进行多序列联配,Mega3.1构建系统发育树何。1.4残留检测方法1.4.1样品前处理口"2】将菌液摇匀，取200pL菌液，用流动相定容至5mL,超声波提取20min,过0.45pm滤膜，待测；以浓度为0.2mg-L1的节嗨磺隆标准样品作为标准，图2PSB07-6的电镜扫描Fig.2SEMphotoofPSB07-6o—PS807.6(eU00443e)RMopgudorMf皿giaEr(tf123087)-LRD114rctrovfvsenvgene(
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