自噬抑制剂氯喹对体外活化肝星状细胞胶原代谢的影响

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2、究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：萄金殳导师签章：痧孙氓暴．b，净；月耘日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·5研究论文自噬抑制剂氯喹对体外活化肝星状细胞胶原代谢的影响前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1111日IJ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·22附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·35结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38综述自噬与肝脏疾病的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·48个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49中文摘要自噬抑制剂氯喹对

4、体外活化肝星状细胞胶原代谢的影响摘要肝纤维化(Hepaticfibrosis，I-W)是各种不同致病因素引起慢性肝病进而发展为肝硬化的共有病理改变和必经途径，是肝脏对各种慢性损伤产生的一种修复反应。其主要病理特征是以胶原为主的细胞外间质(extracellularmatrix，ECM)在肝组织内的过度合成和异常沉积。肝纤维化是可逆的，而肝硬化则难以逆转。因此，阻止甚至逆转肝纤维化是治疗各种慢性肝病、预防其向肝硬化发展的关键所在。对于肝纤维化的防治，迄今尚乏真正有效治疗手段，深入研究肝纤维化的发病机制进而探索有效防治措施，对于治疗各种慢性肝病，预防

5、其向肝纤维化、肝硬化发展有着重要意义。肝星状细胞(hepaticstellatecells，HSCs)是肝纤维化发生过程中产生ECM的主要细胞，HSCs活化是肝纤维化形成的细胞学基础，在肝纤维化发展过程中扮演重要角色。静止状态下，HSCs胞浆内富含脂滴，已有研究表明脂滴的存在能抑制HSCs的活化，而HSCs活化的最具特征性表现是胞浆内脂滴的丢失，转化为肌成纤维细胞，并主要通过两种作用机制促进肝纤维化进程：以I、III型胶原为主的ECM成分生成过多，降解不足；合成并释放一些重要的促进纤维化发生、慢性炎症和血管生成的细胞因子。近来，Friedman等

6、研究发现，在HSCs活化过程中，胞浆内脂滴的丢失与自噬(autophagy)相关，自噬可通过降解脂滴为HSCs活化提供能量。相反，抑制自噬可减少HSCs活化并降低其纤维生成能力，主要表现为0【．平滑肌肌动蛋白(a．smoothmuscleactin，a．SMA)、I型胶原等表达下降。自噬是指从粗面内质网的无核糖体附着区脱落的双层膜包裹部分胞质和细胞内需降解的细胞器、蛋白质等形成自噬体(autophagosome)，并与溶酶体融合形成自噬溶酶体(autolysosome)，进一步降解其所包裹的多余的蛋白质和亚细胞成分，以实现细胞本身代谢需要和某些细

7、胞器的更新，维持自身的稳定。白噬的整个过程主要分为3个阶段：自噬体的初步形成：自噬体膜的延伸；自噬体与溶酶体融合并降解。氯喹(Chloroquine，CQ)可中文摘要通过升高溶酶体内PH值，阻止自噬体与溶酶体的结合而抑制自噬。目前国内外对自噬在肝纤维化中的研究主要侧重于其对肝星状细胞活化的影响，而自噬对活化后的HSCs的生物学作用尚缺乏研究报道。本实验以此为出发点，研究应用不同浓度的自噬抑制剂CQ干预活化的HSC．T6细胞后，I、III型胶原的表达及基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase，MMPs)、基质金属蛋白酶组织抑制

8、因子(tissueinhibitionofmatrixmetalloproteinase，TIMPs)的表达变化，旨在完善自噬对HSCs