il--17对大鼠肝星状细胞胶原代谢的影响及其机制探讨

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1、温州医学院硕士学位论文IL--17对大鼠肝星状细胞胶原代谢的影响及其机制探讨姓名：余盼攀申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：张启瑜2012-05-24温州医学院硕士学位论文IL一17对大鼠肝星状细胞胶原代谢的影响及其机制探讨中文摘要目的本文研究白细胞介素17(IL-17)对大鼠肝星状细胞(HSC—T6)增殖、COLI、TIMP一1表达的影响及细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路在此过程中的调控作用，探讨IL—17对肝星状细胞增殖、胶原代谢的影响及其可能机制。方法1．采用不同浓度的工L一17(Ong／mL、lng

2、／mL、lOng／mL、lOOng／mL、500ng／mL)处理体外培养的大鼠肝星状细胞HSC-T6，应用四甲基偶氮唑蓝法(M订法)检测不同浓度的IL一17处理不同时间(24h、48h、72h)后对HSC-T6细胞体外增殖的影响，采用RT—PCR和ELISA法检测不同浓度的IL-17作用HSC—T624h后COLI和TIMP一1mRNA和蛋白的表达量。得出最佳药物浓度和作用时间进行后续实验。2．根据以上实验结果，我们选择lOOng／mLIL一17作为后续实验。采用MTT法、RT—PCR法和ELISA法检测HSC—T

3、6经ERK信号通路特异性阻滞剂PD98059(20umol／L)干预后IL一17(100ng／mL)对HSC—T6增殖、COLl和TIMP-1mRNA及蛋白表达的影响。3．采用westernblot法检测IL一17(100ng／mL)作用HSC-T6后不同时间点(Omin、5min、15min、30min)后p-ERKl／2、ERKl／2和GAPDH的表达情况。结果1．不同浓度的IL一17(Ong／mL、lng／mL、lOng／mL、lOOng／mL、500ng／mL)处理体外培养的大鼠肝星状细胞HSC—T624h

4、后，细胞增值OD值分别为0．304+0．028：0．307±0．027；0．321±0．013；0．324±0．012；0．326±0．079；作用48h后OD值分别为0．367±0．032；0．372±0．032；0．411±0．024；0．500±0．018；0．524±0．0117；作用72h后OD值分别为0．671±0．027；0．717±0．048；0．765±0．037：0．853±0．038；0．871±0．046。显示出浓度一时间依赖性。作用24h各浓度组与对照组比差异无统计学意义，作用48、72h

5、除lng／mL组与对照组比差异无统计学意义外，其余各组与对照组比差异均有统计学意义(P<0．05)。2．不同浓度的IL一17(Ong／mL、lng／mL、lOng／mL、lOOng／mL、500ng／mL)处理体外培养的大鼠肝星状细胞HSC—T624h后，COLImRNA表达量分别为0．381±0．055：0．406±0．057；0．469±0．05l；0．564±0．034；0．676±0．040。TIMP-1mRNA表达量分别为0．447±0．024；0．469±0．033；0．542±0．016；0．683±

6、0．024；0．836±0．041。COLI蛋白分泌量分别为10．359±2．701；12．846±3．778：28．764±4．156；49．231±1．304；78．793±9．377。TIMP一1蛋白分泌量分别为53．0563温州医学院硕士学位论文±6．670：67．578±5．635；137．082±11．070；194．598±8．760：254．682±12．008。以上结果除ing／mL组与对照组比差异无统计学意义外，其余各组与对照组比差异均有统计学意义(P<0．05)。3．经ERK信号通路特异性阻滞

7、剂PD98059(20umol／L)干预后，IL-17促HSC-T6增殖、COLI和TIMP—ImRNA和蛋白表达的作用受到明显的抑制，与IL-17组比差异均有统计学意义(P<0．05)。4．IL一17(100ng／mL)刺激体外培养的HSC-T6后，能明显激活ERK信号转导通路，并呈现时间依赖性，刺激5min后即可见p-ERKI／2活性增强，作用15min后p-ERKI／2活性继续增强并达到最高峰，随后呈下降趋势，但作用30min后仍有较高表达。结论I．IL—17能促进肝星状细胞HSC—T6增殖，并呈现一定的浓度

8、一时间依赖性。2．IL一17能促进肝星状细胞HSC—T6COLI和TIMP-ImRNA及蛋白的表达，并呈现一定的浓度依赖性。3．ERK信号转导通路特异性阻滞剂PD98059能抑制IL-17促肝星状细胞HSC—T6增殖、COLI和TIMP—ImRNA及蛋白表达。4．IL一17能激活肝星状细胞HSC—T6的ERK信号转导通路，并呈一定的时效关系。关键词IL一17